マイクロアレイCGH法を用いた原子爆弾放射線の継世代的影響調査

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14380261
• 研究機関: (財)放射線影響研究所
• 研究代表者: 高橋 規郎 財団法人放射線影響研究所, 遺伝学部, 副部長(研究員) (40333546)
• 研究分担者: 檜山 桂子 広島大学, 原爆放射線医科学研究所・ゲノム疾患治療研究部門, 助教授 (60253069) ; 檜山 英三 広島大学, 自然科学研究支援開発センター・生命科学研究支援分野生命医科学研究開発部, 教授 (00218744) ; 小平 美江子 財団法人放射線影響研究所, 遺伝学部, 副主任研究員 (60344412)
• キーワード: マイクロアレイ / comparative genomic hybridization (CGH) / 放射線影響 / 継世代影響 / 多型変異 / ヒトゲノム / 欠失型変異

研究概要

この科研補助による研究において、アレイCGH法が有効に使用されるために必要な基礎的要求;(1)大きな欠失を確実に検出するための実験条件の確立、(2)コンピュータ画像処理による、ゲノムコピー数の増減の迅速なる同定、(3)膨大なデータを処理するためのコンピュータソフトの開発とその改良は、前年度にほぼ達成された。本法により、放射線により生ずる100万塩基対(1Mb)を超えるような大きな欠失型変異が見逃されることなく、しかも迅速に検出されることが明らかになった。我々は、約120万塩基対(1.2Mb)毎の間隔で常染色体に位置する約2400種類のBac-クローンを選び、それらを3枚のガラスに分けてスポットした。このマイクロアレイを用いて、被爆者の子供40名および対照群の子供40名から得たゲノムDNAを試料とした集団調査を昨年度来続けている。その結果、2名の対象者で変異型が検出された。この対象者の両親を調べたところ、これらの変異は少なくとも片親から遺伝していることが分かった。従って、新規突然変異は現在のところ同定されていない。この集団調査とは別に、放射線照射細胞より得たゲノムをこのアレイを用いて解析したところ、欠失型変異が数ヶ所に検出された。これをモデルとして、リアルタイムPCR法、サザン法による、変異部分の大きさを同定する実験条件を確立した。従って、集団調査の過程で検出された変異の意味付けが迅速に実施可能となった。対象集団を拡大して本法による検査を行うことにより、従来はモデル動物でしか明らかにされていなかった、放射線の継世代的影響(遺伝的影響)が、ヒトにおいて、初めて明らかになる可能性が現実のものと成った。また同時にこの集団調査の過程で得られる多型変畢は、それらの有する生物学的影響を明らかにする、格好な機会を提供するものと考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Kodaira M.: "Characterization of the microarray-CGH (comparative genomic hybridization) method using model analysis of radiation-induced large deletions at the human HPRT (hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase) locus"J Hiroshima Med Assoc. (in press).
• [文献書誌] Suzuki G.: "LTA252G allele containing haplotype block is associated with high serum C-reactive protein levels"Atherosclerosis. (in press).
• [文献書誌] 小平美江子: "放射線照射で生じたヒト・HPRT(ヒポキサンチン・グアニンフォスフォリポシルトランスフェラーゼ)遺伝子座の大きな欠失解析をモデルとしたマイクロアレイ-CGH(Comparative Genomic Hybridization)法の特徴付け"広島医学. (in press). (2004)
• [文献書誌] Hiyama E.: "T.Expression profiling of favorable and unfavorable neuroblastomas"Pediatr Surg Int. 20. 33-38 (2004)
• [文献書誌] Sasaki M.: "Clinical surveillance of surgical imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa infection in a Japanese hospital"Journal of Hospital Infection. 56. 111-118 (2004)
• [文献書誌] 檜山英三: "肝芽腫におけるテロメラーゼ、hTERT発現"小児外科. 35. 539-544 (2003)
• [文献書誌] Uemura K.: "Comparative analysis of K-ras point mutation, telomerase activity, and p53 overexpression in pancreatic tumours"Oncol Rep. 10. 277-283 (2003)
• [文献書誌] Tsumura H.: "Relevance of atimicrobial agent-induced endotoxin release from in vitro cultured Escherichia coli and in vivo experimetal infection with Gram-negative bacilli"International Journal of Antimicrobial Agents. 21. 463-470 (2003)
• [文献書誌] Morifuji M.: "Fluorescent-based BAT-26 analysis for distinct screening of microsatellite instability in colorectal cancers"Int J Oncol. 22. 807-813 (2003)
• [文献書誌] 品川長夫: "外科感染症分離菌とその薬剤感受性 2001年度分離菌を中心に"The Japanese Journal of Antibiotics. 56. 105-137 (2003)
• [文献書誌] Hiyama E.: "Differential gene expression profiles between neuroblastomas with high telomerase activity and low telomerase activity"J Pediatr Surg. 38. 1730-1734 (2003)
• [文献書誌] 山田慎一: "肝芽腫のcDNA projectによる網羅的遺伝子解析"小児外科. 35. 545-549 (2003)
• [文献書誌] 横山隆: "小児のMRSA感染症とVRE感染症の現状と問題点"小児外科. 35. 1293-1299 (2003)
• [文献書誌] 横山隆: "発熱からみた感染臓器へのアプローチ 5)外科系-腹部臓器を中心に"感染と抗菌薬. 6. 183-188 (2003)
• [文献書誌] 横山隆: "薬剤耐性緑膿菌感染症"綜合臨床. 52. 981-987 (2003)
• [文献書誌] 横山隆: "手術部位を考慮した抗菌薬の適正使用推進"薬事. 45. 1083-1088 (2003)
• [文献書誌] Kumagai K.: "Polymorphisms in the thymidylate synthase and methylenetetrahydrofolate reductase genes and sensitivity to the low-dose methotrexate therapy in patients with rheumatoid arthritis"Int.J.Mol.Med. 11(5). 593-600 (2003)
• [文献書誌] Tanaka T.: "Concise prediction models of anticancer models of 8 drugs using expression data from 12 selected genes"Int.J.Cancer. (in press).
• [文献書誌] Kumazaki T.: "Differential gene expressions during immortalization of normal human fibroblasts and endothelial cells transfected with human telomerase reverse transcriptase (hTERT) gene"Int.J.Oncol. (in press).
• [文献書誌] Ikegami Y.: "Novel aberrations of HPS1 mRNA detected in a case of Hermansky-Pudlak syndrome with pulmonary fibrosis"Sarcoidosis Vasc.Diffuse Lung Dis. (in press).
• [文献書誌] Hiyama E.: "Telomerase as tumor marker"Cancer Lett. 194(2). 221-233 (2003)
• [文献書誌] Tanimoto K.: "Towards molecular medicine : Cancer pharmacogenomics, personalized medicine, and our recent approaches"Ann.Cancer Res.Therap. 11(Nos.1&2). 61-72 (2003)
• [文献書誌] Takahashi N.: "Study for genetic effects of atomic-bomb radiation by using of a DNA microarray-based comparative genomic hybridization (array-CGH) method"Australian Institute of Nuclear Science and Engineering. 1 (2003)
• [文献書誌] Kodaira M.: "Analysis of human HPRT-deletion mutants by the microarray-CGH (comparative genomic hybridization)"Australian Institute of Nuclear Science and Engineering. 1 (2003)
• [文献書誌] 檜山桂子: "癌転移-基礎と臨床のアップデート"日本臨床. 5 (2003)
• [文献書誌] 檜山桂子: "肺癌のテロメア、テロメラーゼ In:末桝恵一(ed.),肺癌の最新医療"先端医療技術研究所. 6 (2003)
• [文献書誌] Hiyama E.: "Clinical application of microarray as a tool of understanding cancer biology"Transworld Research Network. 18 (2003)
• [文献書誌] Hiyama K.: "Non-RI protocols for L-myc allelotyping and deletion mapping of chromosome lp 1n primary lung cancers"Humana Press. 9 (2003)
• [文献書誌] Hiyama K.: "Detection of telomerase activity in lung cancer tissues, 1 edition"Humana Press. 12 (2003)
• [文献書誌] 檜山桂子: "総論10.呼吸器疾患診療における分子生物学の応用."シュミレイション内科 呼吸器疾患を探る 非腫瘍編"(河野修興編著)"永井書店. 5 (2003)
• [文献書誌] 檜山桂子: "呼吸器疾患の遺伝相談."呼吸器診療二頁の秘訣"(福地義之助編)"金原出版. 2 (2003)
• [文献書誌] Shay JW: "Telomerase and Lung Cancer"Lippincott Williams & Wilkins (in press).