研究課題
1.プロモーターDNA上でのエンハンセオソーム構造形成機構の解析一般的に、転写因子は広い範囲のプロモーターDNA領域に複数結合し、さらに転写因子同士が互いに結合してエンハンセオソームと呼ばれる超分子会合体を形成し、転写を活性化する。我々はこのエンハンセオソーム構造の最も典型的な基本単位の一つと考えられる,c-Myb-C/EBP-DNA複合体の相互作用様式を原子レベルで解析している。c-MybとC/EBPは協調的に造血系の標的遺伝子を活性化するが,この転写因子間の協調活性に必要なプロモーターDNA配列を調べると,転写因子結合部位だけでなく,その周辺のDNA配列も厳密に規定されていることがわかってきた。現在,c-Myb結合部位の近傍のDNA塩基配列がエンハンセオソーム形成にどのような効果を持つかを調べるため、c-Myb結合塩基配列近傍に変異を導入したプロモーターDNAを調製し、c-Mybタンパク質の変異プロモーターへの結合をSurface Plasmon Resonance (SPR)法で詳細に解析すると共に、各変異プロモーターのエンハンセオソーム形成に与える影響を解析する目的で,原子間力顕微鏡(AFM)を用いた複合体の画像化による実験を進めているところである。2.Runx1とc-Ets-1タンパク質による協調的転写機構の解明T Cell Receptor α(TCRα)遺伝子は、転写因子Runx1とc-Ets-1によって協調的に転写が促進される。この協調性がどのような機構で起こるのか、その原子レベルでの報告は未だなされていない。そこでこの機構を原子レベルで解明するために、TCRαプロモーターDNA, Runx1, c-Ets-1からなる複合体のX線結晶構造解析を行う準備を進めている。現在、協調性を示すそれぞれの転写因子の最小領域の決定、大量発現、精製法の確立を行っている。
すべて 2003 2002
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