| 研究課題/領域番号 |
14560005
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| 研究機関 | 宮崎大学 |
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研究代表者 |
陳 蘭庄 宮崎大学, フロンティア科学実験総合センター, 助手 (40284822)
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| 研究分担者 |
吉田 薫 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (70183994)
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| キーワード | アポミクシス / アポミクシス候補遺伝子(ASG1) / 有性生殖 / ギニアグラス / イネ / 形質転換体 / 再生植物体 / バイナリーベクター |
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| 研究概要 |
本研究はこれまでに条件的アポミクシス性ギニアグラスから得ているアポミクシス候補遺伝子の機能解析を目的とし、3カ年の計画で有性生殖やアポミクシス性ギニアグラスの形質転換体を作製して実験を進めるものである。今年度は最終年度で以下、得られた成果をまとめた。
暖地型牧草ギニアグラスの有性生殖の2系統及び条件的アポミクシス性ギニアグラス2系統を用いて、それぞれの系統の子房、葉鞘及び成熟した種子由来のカルスを、遺伝子導入実験に使用した。遺伝子導入実験には3種類のバイナリーベクターを用いた。それぞれ異なるアグロバクテリウムに入れてギニアグラスカルスに感染して、抗生物質で抵抗性カルスを選抜して再分化培地で植物体再生をさせた。いま、P2レベルの組換え植物育成室で育成して開花期を待ってそれらの生殖様式がどう変わっているかを調査する予定。
一方、同じ有性生殖のイネ"日本晴"のカルスを用いて感染力の強いpSMA35H2バイナリーベクター35S::ASGIをアグロバクテリウムGV3101/PMP90に入れてイネに感染を行った。その結果、生長力の高いイネの再生植物体を得た。さらに再生したイネの葉からDNAを抽出した。ASG1遺伝子の両端(上流と下流)をカバーする20塩基から、それぞれプライマーを作製して抽出したDNAを鋳型としてPCRを行った。900bp付近に1本のバンドが認められた。バンドのサイズが組換えたASGI遺伝子と一致していることから、再分化培地に移ったカルスは外来遺伝子ASGIが確かに導入されていることが明らかになった。いま、それらをP2レベルの組換え植物育成室で育成して開花期を待ってそれらの生殖様式がどう変わっているかを調査する予定。
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