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これまでもトリグリセリド(TG)分子種分析は世界的に行われてきたが、そのほとんどがTG分子種数の少ない植物油に限られ、しかも定量分析に関してはほとんど行われていない。よって本研究では、最も複雑なTG分子種を持つ魚油のTG分子種分析及びその定量を目的として実験を行っている。
(1)分子種の分析条件確立
TG分子種分析は通常、逆相系の液体クロマトグラフィー(HPLC)で分析される。本研究ではこれまで使用されてきたODS(C18)カラムに代え、トリアコンタシル(C30)カラムを用い魚油TGの分析を行った。結果、分離が格段に上昇し、しかも、エタノール、アセトニトリルなどの205nm以下にしか吸収を持たない溶媒のみを使用してTG分子種の分離が可能であることを発見した。
一方これまで検出は、RI検出器(不安定)、光散乱検出器(定量性が低い)などが使用されてきた。これは、ODSカラムによるアルコール系溶媒での分離が悪く、アセトンなどの溶媒を使用していたため、UV検出器が使用出来なかったことによる。本研究の分析条件では、アルコールが使用できるため、UV検出器(210nm)を用いての分析が可能となった。さらに、HPLCへの注入量を変えて、注入量と各ピーク面積の相関を調べたところ、全てのピークで直線性を示すことを確認した。
(2)標準サンプル合成方法の確立
各TG分子種の標準サンプル合成は、固定化リパーゼを用い、グリセリンと脂肪酸から、各種グリセリドを合成し、さらにそれらから精製したジグリセリド、もしくはモノグリセリドを用い、化学反応により脂肪酸を導入する方法で行っている。これまで、[EPA-EPA-オレイン酸]TGおよび[EPA-オレイン酸-EPA]TGの構造異性体の合成に成功している。
今後は新たに合成したTG分子種を用い、各TG分子種の検量線を作成する予定である。
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