| 研究課題/領域番号 |
14570013
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
野村 貴子 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (20116437)
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| 研究分担者 |
山田 輝夫 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (00033225)
小阪 淳 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (40243216)
佐々木 順造 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (30093686)
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| キーワード | 内分泌攪乱物質 / フタル酸エステル / 活性酸素 / cDNA / アポトーシス / ラット / 精巣 / in situハイブリダイゼーション |
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| 研究概要 |
プラスチックの可塑剤であるフタル酸ジ-2-エチルヘキシル(DEHP)をラットに経口投与することにより内分泌撹乱物質の精巣に及ぼす影響を検討した。35日令のウィスター系ラットにDEHPを経口投与し、投与直後から24時間後までの精巣の組織の変化を光学顕微鏡、電子顕微鏡を用いて検索した。その結果6〜9時間後に精細管に変性した精母細胞や多核の精子細胞が多数観察され、免疫組織学的には、TUNEL陽性細胞が精細管中に検出され、生殖細胞のアポトーシスが誘起されることが示唆された。
DEHPを投与したラットの精巣のmRNAより^<32>P標識したcDNAを合成し、cDNAマイクロアレイを用いて、その遺伝子パターンを解析しDEHP投与直後から24時間後までの変化を調べた。その結果、testis lipid-binding protein(TLBP)など、数種の遺伝子の発現が著明に減少しているととが、判明したが、精巣切片でのISH解析ではステージに特異的な発現が認められたがcDNAほど顕著な遺伝子の発現の減少は認められなかった。
ISH解析による遺伝子の発現を数値化し様々な遺伝子の発現の増減、精細管内の各細胞での発現強度の差をより明確にすることを目的に、その実験モデルとして、ribosormal RNAを用いポスタリゼーションの機能により精巣内の遺伝子の発現の定量化を試みた。その結果、その発現は、精細管のステージ及び精細胞の変化に従い特異的なものであり、この染色強度の差をポスタリゼーションにより5段階に評価し数個の精細管の平均値をとることにより数値化が可能となった。この方法を用い、今後、内分泌撹乱物質による各種遺伝子の発現への影響を精巣切片で定量的に比較し活性酸素分子種の役割を明らかにしていく予定である。
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