| 研究課題/領域番号 |
14570101
|
|---|
| 研究機関 | 金沢大学 |
|---|
研究代表者 |
高橋 吉孝 金沢大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (10236333)
|
|---|
| 研究分担者 |
吉本 谷博 金沢大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (60127876)
村上 尚 金沢大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (40210009)
|
|---|
| キーワード | 12 / 15-リポシゲナーゼ / マクロファージ / 酸化LDL / LDL受容体関連蛋白 / コレステロールエステル / トランスロケーション |
|---|
| 研究概要 |
我々は、これまで動脈硬化発症に重要な役割を果たす酸化型LDLの生成にマクロファージの12/15-リポキシゲナーゼが必須であることを、12/15-リポキシゲナーゼを安定発現させたマクロファージ様細胞株J774A.1を用いて示してきた。さらに、マクロファージ表面に発現するLDL受容体関連蛋白(LRP)がLDLと結合することが、12/15-リポキシゲナーゼによるLDLの酸化に必須であることを示した。このマクロファージ上のLRPを介した12/15-リポキシゲナーゼによるLDLの酸化機構をさらに詳細に調べるために、蛍光色素DiIで標識したLDLをマクロファージとインキュベートすると、細胞は蛍光色素でdiffuseに染色され、LRPがLDL粒子を細胞内に取り込むのではなく、LDL粒子中のコレステロールエステルのみを細胞膜に選択的に取り込むことが示唆された。細胞膜に取り込まれたコレステロールエステルが、元々細胞質に存在する12/15-リポキシゲナーゼによりどのように酸化されるのかを詳細に調べるため、LDLで処理した細胞の中の12/15-リポキシゲナーゼの局在を調べた。抗12/15-リポキシゲナーゼ抗体を用いたウエスタンブロット及び免疫組織染色により、LDL処理したマクロファージの12/15-リポキシゲナーゼが細胞質から細胞膜にトランスロケーションすることが示された。このトランスロケーションは抗LRP抗体で抑制された。さらに、酵素活性自体は阻害しないがトランスロケーションを阻害するL655238はLDLの酸化を濃度依存的に抑制した。以上より、LRPを介したLDLによる酵素のトランスロケーションがLDLの酸化に必須であることが示され、LDL粒子から細胞膜に選択的に取り込まれたコレステロールエステルが、細胞膜に移行した12/15-リポキシゲナーゼにより酸化されることが示唆された。
|
