| 研究課題/領域番号 |
14570184
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
市原 正智 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (00314013)
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| 研究分担者 |
村雲 芳樹 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (40324438)
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| キーワード | RET / GDNF / kidney develoment / ureteric bud / BTB / POZ / SEP1 / tubulin |
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| 研究概要 |
GDNF刺激によりRETチロシンキナーゼの下流で誘導される遺伝子として同定された2遺伝子にさらに検討を加えた。一つはGZF1と命名した新規蛋白である。この遺伝子は腎臓の発生過程でureteric budに特異的に発現されることを昨年度までに報告した。今年度はさらにウエスタンブロットで蛋白発現の抑制を確認できた複数のアンチセンスオリゴでureteric bud形成が著明に抑制されることを確認するとともにpan cytokeratin抗体の染色で形態的に明らかにureteric bud形成の形成不全を示すことが出来た。またGZF1にGFP配列を付加しHEK293細胞に発現させると核への局在が確認されたことを昨年度報告したが、GFK発現細胞のlysateを、核および細胞質分画に分画しウエスタンブロットを行うことでも核への局在を証明した。さらに現在CAST法をもちいてGZF1のプロモーター領域での結合配列の同定をすすめ結合のコンセンサス配列を決定した。またyeast two hybrid法を用いてGZF1と相互作用するタンパク質の同定を進めているところである。なお昨年度および今年度の結果はJ.Biol.Chemに報告し受理されている。一方5'→3'exoribonucleaseのヒトホモローグであるSEP1(Xrn1p)もGDNF刺激によりRETチロシンキナーゼの下流で誘導される遺伝子として機能解析を進めた。これまでにGDNF刺激下で初期誘導に加えて、後期にも強い誘導がかかること、マウス組織でも胎生期後期にRetの発現に一致して脊髄後根神経節、腸管神経などの神経組織に発現が確認されたことなどを昨年度までに報告してきた。今年度はチューブリンとの結合を免疫沈降法で確認し、これまでの結果とともにNeuroscienceに報告し受理された。
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