突然変異導入に関与するREV蛋白の分子生物学的特性の解析

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14570185
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 村雲 芳樹 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (40324438)
• キーワード: REV1 / focus形成 / 紫外線照射 / 細胞内局在 / DNA損傷 / 損傷乗り越え型DNA合成

研究概要

本年度は、REV蛋白の細胞内局在についての詳細な検討を行った。前年度ヒトREV蛋白の細胞内局在を検討した結果、REV1蛋白は核内に存在し、ある割合で数十個の小顆粒状のfocusを形成していることが判明したので、本年度はこのREV1のfocus形成と紫外線照射によるDNA損傷との関係に着目した。GFP融合REV1蛋白を発現させる発現ベクターを作成し、COS7細胞にトランスフェクションすることによりGFP-REV1蛋白を強制発現させ、その細胞に紫外線照射することによりDNA損傷を与えてREV1のfocus形成がどのように変化するかを検討した。紫外線照射しない状態で約3%の細胞でfocus形成が認められたが、8J/m^2の紫外線照射後8時間では約25%の細胞でfocus形成が認められた。また、このfocus形成率は、時間依存性に、また紫外線量依存性に増加した。REV1のfocusはDNA複製forkの指標であるPCNAと共局在を示し、また多くのfocusは細胞周期のS期で形成されていた。これらの結果より、REV1のfocus形成は紫外線照射に反応して誘導され、しかも細胞周期のS期のDNA合成と関係している可能性が示唆された。また、REV1の種々のdeletion mutantを用いて、REV1のfocus形成に重要なドメインを検討したところ、REV1のC末端部分がfocus形成に重要であることが判明した。この部位は損傷乗り越え型DNA複製に関与する他の蛋白、Polκ、Polη、REV7との結合ドメインの存在する部位であり、REV1の機能にこれらの蛋白が関与している可能性が示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Nishikawa, M., et al.: "Cys611Ser mutation in RET proto-oncogene in a kindred with medullary thyroid carcinoma and Hirschsprung's disease"Eur.J.Hum.Genet.. 11. 364-368 (2003)
• [文献書誌] Shimoyama, Y., et al.: "Identification of human SEP1 as a glial cell line-derived neurotrophic factor-inducible protein and its expression in the nervous system"Neuroscience. 121. 899-906 (2003)
• [文献書誌] Fukuda, N., et al.: "Identification of a novel GDNF-inducible gene required for renal branching morphogenesis"J.Biol.Chem.. 287. 50386-50392 (2003)
• [文献書誌] Kawai, K., et al.: "Establishment and characterization of mouse mammary carcinoma cell lines expressing RET with a multiple endocrine neoplasia 2A mutation"Cancer sci.. 94. 992-997 (2003)
• [文献書誌] Ichihara, M., et al.: "RET and neuroendocrine tumors"Cancer Letters. (in press).
• [文献書誌] Hashimoto, M., et al.: "Expression of CD109 in human cancer"Oncogene. (in press).