| 研究概要 |
骨芽細胞は、1)骨髄造血系細胞の増殖に必要なM-CSFなど液性因子の供給、2)破骨細胞への最終分化に不可欠な破骨細胞分化因子(RANKL)の発現を介して破骨細胞形成を支持する。
私どもはマウスならびにヒトRANKL遺伝子5'上流プロモータ領域に関して、破骨細胞形成促進作用を示すVitamin D3や副甲状腺ホルモン関連蛋白(PTHrP)の転写促進機構を検討した。マウスプロモータではVDRE(-940)の解析、ヒトプロモータについては3箇所の候補配列(-1584)、(-1418)、(-1383)のうち、機能的VDREとして最上流の(-1584)を解析した。
さらに、悪性腫瘍骨転移巣におけるRANKL発現を検索するために、マウスおよびヒトRANKL遺伝子に対する高感度・特異的なプローブを作成してin situ hybridization法を行い、病理解剖症例の転移性骨腫瘍におけるPTHrP発現と溶骨性骨病変において骨芽細胞・骨髄間質細胞にRANKL mRNAを検出した。
PTHrPによるRANKL発現制御については、マウス及びヒトのRANKL遺伝子プロモータコンストラクトを用いたtransfection系に、PTHrP処理を行うとともにPKAのagonist,antagonist投与を行い転写活性に及ぼす効果を検討した。マウス及びヒトRANKL遺伝子プロモータにおけるcAMP応答配列(CRE)を検索した。マウス、ヒトいずれにも古典的なCREは存在しないが、各々数カ所の候補配列に着目してEMSA assayや変異導入実験を行い、機能的CREの存在を明らかにした。プロモータ活性の検討に加えて、H3,H4ヒストンに対する抗体を用いてのCHIP assayを行って、PTHrPもしくはPKA agonistの作用でクロマチン活性化が起こることを確認した。
以上の成果は、英文誌に報告した(J Cell Biochem 2003)。また、成果の一部は第92回日本病理学会総会、第21回日本骨代謝学会、第62回日本癌学会総会、第25回米国骨代謝学会議にて報告した。
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