| 研究課題/領域番号 |
14570238
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
小松澤 均 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (90253088)
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| 研究分担者 |
小原 勝 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助手 (80253095)
藤原 環 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助手 (90274092)
菅井 基行 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (10201568)
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| キーワード | 黄色ブドウ球菌 / メチシリン / バンコマイシン / 薬剤耐性 / 細胞壁合成 / MRSA |
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| 研究概要 |
細胞壁合成系に直接的に関与する因子をコードする遺伝子を約20個および間接的に関与していると報告されている因子をコードする遺伝子約10個をPCRにより増幅しDNAフラグメントを得、シーケンスを行った結果登録されているものと一致した。これらの因子についてdiferential display法を用いて実験的に得られたバンコマイシン耐性菌およびその親株について発現量を比較したが著明な変化が認められず、また系として正確性に欠ける面もあり、次にタンパクレベルでの検討を試みた。同定した因子のうち5つのペニシリン結合タンパク、2つのmonofunctional transglycosylase(mTGase)、細胞内に取り込んだ糖を細胞壁に運ぶ因子についてリコンビナントタンパクを作製、精製後ウサギに免疫することで抗血清を得た。得られた抗血清を用いてそれぞれの株からタンパクを抽出し、ウェスタン解析により比較検討を試みたが、バンコマイシン耐性菌と親株とに発現量に違いは認められなかった。しかし、mTGase(sgtB)の過剰発現株でバンコマイシンの感受性が少し低下することが認められた。TGaseの阻害剤であるモエノマイシン耐性変異株を感受性株8株よりそれぞれ分離したところ、いずれも変異株はバンコマイシンにも耐性を示した。しかし、これらの変異株のTGaseの発現量には変化が認められず他の因子の関与が示唆された。現在、このバンコマイシン耐性およびモエノマイシン耐性変異株についてプロテオーム解析を検討中である。
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