|
EBウイルスはヒトB細胞に潜伏感染し宿主に終生住み着くヘルペスウイルスであり、免疫抑制時に潜伏していたEBウイルスが様々の疾病や腫瘍の原因となると考えられる。本研究は、潜伏感染成立に必須のウイルス核蛋白EBNA-2、EBNA-LPに焦点を絞り、各核蛋白の機能解析を通してEBウイルス潜伏感染の機構解明を目的とした。すでに我々は、EBNA-2が転写活性化因子としてウイルスや細胞の遺伝子を活性化し、EBNA-LPはEBNA-2の転写活性化を促進する補因子機能を持つことを報告してきた。さらに我々は転写活性化にドミナントネガティブ効果を持つEBNA-LP変異体の存在を発見したので、本年度はその変異体の解析と変異体利用のための準備実験に絞り、以下の実験結果を得た。(1)EBNA-2、EBNA-LPおよびEBNA-2依存プロモータを持ったリポーター遺伝子を共発現し、リポーターアッセイを行った。EBNA-LPドミナントネガティブの効果はEBNA-2を直接介していないことが示された。(2)導入遺伝子量をかえて発現強度をしらべたところ、ドミナントネガティブ効果は、変異体遺伝子導入量に相関しDose dependentであった。(3)EBNA-LPの一部領域とGST融合蛋白を多種類作り、これらとEBNA-LP発現細胞などのライゼートをつかったpull-downアッセイを行った。EBNA-2の転写活性化に重要な領域とEBNA-LP変異体が相互作用する結果が示された。(4)EBNA-LPはself-associationをすることが、免疫沈降実験などで示された。以上の結果より、補因子機能をあらわすためにはEBNA-LPの多量体形成が重要であることを意味していた。EBNA-2とEBNA-LP変異体の相互作用が見られることから、野生型では間接的相互作用が重要であることが示唆された。
|
