HCV導入肝細胞を用いたラジカル誘導性DNA傷害機構の解明とそれに基づく治療戦略

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14570487
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 加藤 淳二 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (20244345)
• 研究分担者: 瀧本 理修 札幌医科大学, 医学部, 助手 (10336399) ; 新津 洋司郎 札幌医科大学, 医学部, 教授 (10045502)
• キーワード: HCV / oxidative stress / Huh7 / 8-OHdG / TGF-α / Core

研究概要

平成14年度の検討では、genotype 1b型のhepatitis C virus (HCV) full length cDNA(CV-J4L6S,米国NIH, Dr. Bukhより供与)より、core蛋白のcoding regionをPCR法にて増幅し、発現plasmid pCDNA-V5に組み込んだ(pCD-HCV core)。PCD-HCV coreをヒト肝癌細胞(Huh7)にリポフェクトアミンを用いてトランスフェクションした。Core蛋白の発現は、ウエスタンブロットで確認した。HCV core蛋白を発現したHuh7では親株に比べて、DNA中の8-hydroxy-2'-deoxyguanosineの蓄積量が有意に増加するとともに、^3H-thymidineの取り込みが有意に亢進した。また、同細胞では転写因子NF-κBの活性化が観察された。Core蛋白の導入によって、発現が変化した遺伝子をcDNA microarray法で探索したところ、'プロモーター領域にκB配列し増殖に関連する標的遺伝子候補としてTGF-αが見出された。そこで次に、TGF-α遺伝子のプロモーター領域1.1kbをpTGF-α/Luc vectorに組み込みレポーターアッセイを行ったところ、core遺伝子発現細胞において、TGF-α転写が誘導されることが確認された。平成15年度では、core蛋白の導入によって生じる細胞増殖促進機序およびラジカル誘導性の酸化的DNA傷害の機構について、さらに検討を進める予定である。

研究成果

• [文献書誌] Kato J, Sato Y, et al.: "Ethanol Induces Transforming Growth Factor-α Exiwession in Hepatocytes, Leading to Stimulation of Collagen Synthesis by Hepatic Stellate Cells"Alc Clin Exp Res. (印刷中). (2003)
• [文献書誌] Sasaki, H., Kato J, et al.: "Induction at Heat Shock Protein 47 Synthesis by TGF-beta and IL-1beta Via Enhancement of the Heat Shock Element Binding Activity of Heat Shock Transcription Factor 1"J Immunol. 168・10. 5178-5163 (2002)
• [文献書誌] Takahashi, M., Kato J et al.: "E1B-55K-Deleted Adenovirus Expressing E1A-13S by AFP-Enhancer/promoter is Capable of Highly Specific Replication in AFP-Producing Hepatocellular Carcinoma and Eradication of Established Tumor"Mol Ther. 5・5. 627-634 (2002)