|
§疾患特異的自己抗原の同定
昨年度までの研究で作製されたPBCモデルの免疫動態を解析し、胆管細胞認識自己抗体、CTLが誘導された場合に以下の検討を行った。
1)SEREX法を用いた自己抗体が認識する自己抗原の同定
まずPBCが惹起された肝臓から胆管細胞を分離しmRNAを抽出、合成したcDNAをファージにパッケージングしてcDNA発現ライブラリーの作製を試み、これを大腸菌に発現させIPTGで誘導された蛋白質をニトロセルロース膜に転写し、バクテリア吸収処置を施した血清と反応させHRP標識抗IgG抗体で陽性クローンをスクリーニングする予定であった。しかし、cDNAライブラリー作製は何とか出来たものの、大腸菌に発現させる段階でうまくタンパクの発現がみられず、PBCモデルでの自己抗体が認識する抗原のcDNAの塩基配列を決定できなかった。
2)cDNAライブラリー発現クローニングによるCTLが認識する自己抗原の同定
PBCが惹起されたマウス脾細胞から自己胆管細胞障害性CTLクローンの作製を試みた。またPBCが惹起された肝臓から肝細胞を分離しmRNAを抽出、合成したcDNAをファージにパッケージングして発現ライブラリーの作製も試みた。CTLクローンの作製は成功し4クローンほどとれ、発現ライブラリーも作製できた。しかし当初の予定のCOS細胞にプラスミドプールと抗原提示に必要なclass I cDNAを導入し過剰発現させ、CTLクローンと混合培養しIL-2分泌を指標にスクリーニングを行う段階がうまくいかず、CTLクローンのT細胞エピトープを決定することは出来なかった。
|
