心不全における免疫担当細胞活性化の機序解明と転写因子解析による新しい治療薬の開発

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14570636
• 研究機関: 群馬大学
• 研究代表者: 横山 知行 群馬大学, 医学部, 教授 (70312890)
• 研究分担者: 倉林 正彦 群馬大学, 医学部, 教授 (00215047) ; 新井 昌史 群馬大学, 医学部, 講師 (60270857)
• キーワード: 腫瘍壊死因子 / 転写因子 / アンジオテンシンII / リポポリサッカライド / プロモーター

研究概要

TNF産生にかかわるプロモーター領域および転写因子を検討した。ルシフェラーゼ法による転写活性の検討では、ヒトTNFαmRNA遺伝子のプロモーター活性はLPS、アンジオテンシンIIおよびエンドセリンI刺激により有意に増加した。また、プロモーターの5'-欠失変異体を用いた解析から、LPSによる活性化にはプロモーターの-200から-120bpまでの領域が、また、アンジオテンシンIIによる活性化にはプロモーターの-120から-70bpまでの領域が関与していると考えられた。-200から-120bpの領域にはSp1/Egr1(-172)結合部位が、-120から-70bpの領域には、Ets(-116)およびCRE(-106)、κB3(-97)結合部位が含まれる。Electrophoretic mobility shift assayによる検討から、LPS刺激では転写因子のSp1およびSp3がSp1結合部位に結合するが、Egr1結合部位は重要でないことが明らかになった。一方、アンジオテンシンII刺激ではATF2とcjunがCRE結合部位に結合してDNA-蛋白複合体を作るが、EtsおよびκB3結合部位は重要でないことが明らかになった。さらに、Sp1およびCRE結合部位にそれぞれ変異を導入し、LPSおよびアンジオテンシンII刺激によるTNFαmRNA遺伝子のプロモーター活性を測定したところ、LPS刺激においてはSp1結合部位が、アンジオテンシンII刺激ではCRE結合部位が機能的にもプロモーターの活性化に重要であることが裏付けられた。以上より、LPS刺激を主体とする感染症とレニンーアンジオテンシン系の活性化を主体とする心不全あるいは心肥大においては、心臓におけるTNF産生機序が異なると推察される。

研究成果

• [文献書誌] Hoshino Y, Nakamura T, Yokoyama T他: "Successfiul treatment of renovascular hypertension due to fibromuscular dysplasia by intravascular ultrasound-guided atherectomy"Nephron. 91(3). 521-525 (2002)
• [文献書誌] Tanaka T, Akiyama H, Yokoyama T他: "Endothelial PAS domain protein 1 (EPAS1) induces adrenomedullin gene expression in cardiac myocytes : role of EPAS1 in an inflammatory response in cardiac myocytes"J Mol Cell Cardiol. 34(7). 739-748 (2002)
• [文献書誌] Tomaru Ki K, Arai M, Yokoyama T他: "Transcriptional activation of the BNP gene by lipopolysaccharide is mediated through GATA elements in neonatal rat cardiac myocytes"J Mol Cell Cardiol. 34(6). 649-659 (2002)
• [文献書誌] Yoshida A, Kand T, Yokoyama T他: "Interleukin-18 reduces expression of cardiac tumor necrosis factor-alpha and atrial natriuretic peptide in a murine model of viral myocarditis"Life Sci. 70(11). 1225-1234 (2002)
• [文献書誌] Tanaka T, Kanda T, Yokoyama T他: "Overexpression of interleukin-6 aggravates viral myocarditis : impaired increase in tumor necrosis factor-alpha"J Mol Cell Cardiol. 33(9). 1627-1635 (2001)
• [文献書誌] Sekiguchi K, Kurabayashi M, Yokoyama T他: "Homeobox protein Hex induces SMemb/nonmuscle myosin heavy chain-B gene expression through the cAMP-responsive element"Circ Res. 88(1). 52-58 (2001)