| 研究課題/領域番号 |
14570775
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
服部 元史 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (50192274)
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| 研究分担者 |
秋岡 祐子 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (90212422)
土谷 健 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (00246472)
伊藤 克己 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (90056771)
近本 裕子 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (80307529)
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| キーワード | 原発性FSGS / 液性因子 / ポドサイト / 蛋白尿 / CDNAアレイ |
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| 研究概要 |
原発性巣状糸球体硬化症(focal segmental glomerulosclerosis : FSGS)の病因や病態の詳細は十分に明らかではないが、一部の患者では血漿中に糸球体濾過障壁の蛋白透過性を亢進させる何らかの液性因子(蛋白尿惹起液性因子:CFs)が存在する可能性が強く示唆されている。一方、最近の研究により、蛋白尿発症におけるポドサイトの重要性と濾過障壁の分子レベルでの理解が進んでいる。原発性FSGSにおける蛋白尿発症機序のkey-stepとして、CFsによる直接的なポドサイト障害が大きな役割を果たしている可能性が想定されるため、今回、原発性FSGS患者血漿特異的に発現が変化するポドサイト関連分子群の同定を目的として、原発性FSGS患者血漿とマウス培養ポドサイト細胞(MPC)とのdirect-interactionについて、主にcDNAアレイシステムを用いて検討した。
MPCは温度感受性変異株SV40由来のlarge T-antigenを導入したトランスジェニックマウスから樹立された細胞株で、発ガン遺伝子の許容温度である33℃で培養している間は増殖するが、非許容温度37℃では細胞は増殖を止め、微小管依存性の突起形成を認めるようになる(分化する)。cDNAアレイシステムは、Clontech社製のAtlas mouse 1.2 array(検討遺伝子数は1176個)を使用した。なお、原発性FSGS患者血漿の添加によって特異的に変化する遺伝子群を同定する目的で、コントロールとして、徴小変化型ネフローゼ症候群(MCNS)患者血漿、ネフローゼ状態にある紫斑病性腎炎(HSPN)患者血漿、健常人血漿(FFP)、さらに細胞毒性のコントロールとしてピューロマイシン・アミノヌクレオシドの影響についても検討した。
各種血漿添加前後の遺伝子発現プロファイルの差をAtlas Image Softwareを用いて解析しているが、原発性FSGS患者血漿の添加によって、ポドサイトと糸球体基底膜との接着に関与する分子群のmRNA発現がdown-regulationされる可能性が示された。現在、real-time PCR法によって、それら結果の妥当性について確認しているところであるが、今後、原発性FSGS患者血漿特異的に発現が変化するポドサイト関連分子群をマーカーとしたbio-assayシステムが確立されれば、CFsの分離・同定に向けて有力なツールになるものと期待される。
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