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我々は、ITD傍膜貫通(JM)領域が正常FLT3分子と複合体を形成することにより、正常FLT3分子の自己活性化抑制機構を解除することを証明している。しかし、この自己活性化抑制機構がFLT3分子自身によるものか、抑制制御分子の結合によるものか、あるいは変異FLT3分子に特異的に結合する標的分子の活性化によりもたらされるのかは明らかではない。そこでまず、この活性化機構のメカニズムの解析を行い次の様な知見を得た。
1.FLT3の細胞内領域を細分化して発現ベクターに組み込みCos7細胞に発現し、各領域間の相互結合関係について解析したところ、JM領域とTK領域には、intramolecular associationの存在が示唆された。
2.ITD-JM領域と正常JM領域をbaitとして、ヒト骨髄細胞cDNAライブラリーをtwo-hybridシステムによりスクリーニングし、ITD-JM領域及び正常JM領域に特異的に結合する分子を同定した。現在、細胞内におけるこれらの分子の生理学的機能につき解析中である。
FLT3遺伝子変異を伴う急性骨髄性白血病における分化誘導療法開発への基礎的検討として、変異FLT3導入32D細胞におけるG-CSF依存性好中球分化機構の抑制機序を分化関連遺伝子の発現量を定量化することにより検討し以下の知見を得た。
1.正常のFL/FLT3刺激は、G-CSF依存性の好中球分化を抑制するが、完全ではない。一方、変異FLT3によるシグナルは、これを完全に抑制する。
2.正常及び変異FLT3シグナルによる好中球分化抑制は、G-CSFによってもたらされるMPO、C/EBP-α、C/EBP-εの発現抑制にある。しかし、C/EBP-αの発現は正常のFL/FLT3刺激では抑制されず、完全な分化抑制が起こらない理由と考えられた。
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