活性化変異c-Kit、Flt3の腫瘍原性シグナル伝達と標的遺伝子の解析

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14570977
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 水木 満佐央 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (80283761)
• 研究分担者: 松村 到 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (00294083) ; 金倉 譲 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (20177489)
• キーワード: receptor tyrosine kinase / mutation / acute myeloid leukemia / targeting therapy / chemotaxis / STAT

研究概要

1.Kit, Flt3シグナル伝達に関与する細胞内ドメインチロシン残基の検討:野生型c-Kit細胞質内各Tyr残基のPheに置換にて細胞機能に及ぼす影響を検討した。増殖・生存は影響を受けなかったがTyr567,569,719置換は細胞遊走を阻害した。Tyr567-src family kinase-p38MAP kinase-Ca2+influx-Er k1/2のシグナル経路及びTyr719-PI3-Kinase-Ca2+influxのシグナルの経路の2経路が協調的に細胞遊走をもたらすことを明らかにした。一方、Tyr719/PI3-Kinaseはc-Kitキナーゼ変異型でのキナーゼ活性に重要である知見を得ていたが、Flt3キナーゼ領域変異型では同領域のtyr残基およびPI3-Kinaseの会合ともキナーゼ活性に関連しないことを新たに見い出した。
2.活性化変異c-Kitレセプター特異的阻害療法の開発:STI571,AG1296,SU5614などのチロシンキナーゼ阻害剤が膜直下型変異c-Kitには有効であるが、キナーゼ領域型には単独、併用にても全く無効で、PP1のみが部分的に有効であることを見い出した。
3.活性化変異c-Kit, Flt3特異的標的遺伝子の解析:Flt3-ITDを用いたmicrochip解析にて特異的発現が認められたSTAT3/5の標的遺伝子の発現が、c-Kit変異型においても認められ、活性化変異レセプターチロシンキナーゼの腫瘍性シグナルがSTAT3/5を共通としている事を見い出した。またその標的遺伝子の一つであるpim-2はAML症例において高発現しており今後の分子標的の対象と考えられた。一方Flt3-ITDではC/EBPalpha, PU.1などの骨髄分化に必須の転写因子の発現が抑制されており、AMLにおける分化の阻害への関連性が疑われた。

研究成果

• [文献書誌] 上田周二: "Critical roles of c-kit tyrosine residues 567 and 719 in stem cell cell factor-induced chemotaxis : contribution of src family kinase and PI3-kinase on calcium mobilization and cell migration"Blood. 99. 3342-3349 (2002)
• [文献書誌] 田中弘和: "E2F-1 and c-Myc potentiate apoptosis through inhibition NF-kB that facilitates MnSOD-mediated ROS elimination"Molecuar Cell. 9. 1017-1029 (2002)
• [文献書誌] 園山順子: "Functional cooperation among Ras, STATS and P13-K is required for full oncogenic activities of BCR/ABL in K562 cells"J. Biol. Chem. 277. 8076-8082 (2002)
• [文献書誌] 上田周二: "Constitutive activation of c-kit by the juxtamembrane but not the catalytic domain mutations is inhibited selectively by tyrosine kinase inhibitors STI571 and AG1296"Int. J. Hematol. 76. 427-435 (2002)
• [文献書誌] 橋本光司: "Necessity of tyrosine 719 and phosphatidylinositol 3'-kinas-mediated signal pathway inconstitutive activation and oncogenic potential of c-kit receptor tyrosine kinase with the D814V mutation"Blood. 101. 1094-1102 (2003)
• [文献書誌] 水木満佐央: "Suppression of myeloid transcription factors and induction of STAT response genes by AML-specific Flt3 mutations"Blood. (印刷中). (2003)