• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 課題ページに戻る

2003 年度 実績報告書

乳癌細胞におけるオーファン受容体SXRを介した標的遺伝子の同定

研究課題

研究課題/領域番号 14571079
研究機関(財)冲中記念成人病研究所

研究代表者

竹下 章  財団法人冲中記念成人病研究所, 研究員 (20322646)

研究分担者 田口 学  財団法人冲中記念成人病研究所, 研究員 (00265141)
小澤 安則  財団法人冲中記念成人病研究所, 研究員 (10124306)
キーワード多剤耐性 / SXR / MDR1 / コレプレッサー / SRC-1 / SMRT / コアクティベーター / ドミナントネガティブ
研究概要

はじめに)癌細胞が多剤耐性を獲得する機序のひとつにMDR1遺伝子の高発現があげられる。MDR1は核内ホルモン受容体SXRにより発現調節されるが、パクリタキセルなどの抗癌剤やリファンピシン(RFP)はSXRにリガンドとして結合しMDR1発現を増加させる。一般に変異受容体には正常受容体の機能を阻害するドミナントネガティブ作用がある。本研究は1)変異SXRの作成と機能解析、2)癌細胞に変異SXRを過剰発現させ内因性SXRの機能を阻害してMDR1発現が抑制されるかを検討し多剤耐性に対する遺伝子治療の可能性を探る。
方法)434アミノ酸SXRのC端13個を欠失した変異SXR(MUT-SXR)、野生型SXR(WTSXR)、そしてMDR1プロモーター領域を組み込んだMDR1-TK-LUCレポーターをCV1細胞にトランスフェクトしレポーターアッセイをおこなった。さらにMDR1 mRNA測定のためリアルタイムPCRを大腸癌細胞株LS174T細胞を用いておこなった。
結果)レポーターアッセイでRFP刺激によるWTの転写活性化はMUTにより抑制された。このドミナントネガティブ効果の機序を知るため2-ハイブリッド法によりcoacdvator(SRC-1)やcorepressor(NCoR,SMRT)とSXRの結合を検討した。SRC-1はWTとRFP依存性に結合したが、MUTとは結合しなかった。一方NCoRやSMRTはWTに比してMUTとより強く結合した。リアルタイムPCRによるMDR1 mRNA定量法を確立しLS174T細胞でMDR1 mRNAはRFP依存性に約5倍増加した(10μM)。
考察)MUT-SXRはドミナントネガティブ効果によりMDR1発現を抑える可能性が示唆された。現存LS174T細胞にMUT-SXRを過剰発現させた株を作成しリアルタイムPCRにてMDR1発現を評価中である。

  • 研究成果

    (3件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (3件)

  • [文献書誌] Akira Takeshita et al.: "Putative role of the orphan nuclear receptor SXR (steroid and xenobiotic receptor) in the mechanism of CYP3A4 inhibition by xenobiotics."The Journal of Biological Chemistry. 277・36. 32453-32458 (2002)

  • [文献書誌] Toshiharu Iwasaki et al.: "Polychiorinated biphenyls suppress thyroid hormone-induced transactivation."Biochemical and Biophysical Research Communications. 299・3. 384-388 (2002)

  • [文献書誌] Wataru Miyazaki et al.: "Polychiorinated biphenyls (PCBs) suppress thyroid hormone (TH) receptor (TR)-mediated transcription through a novel mechanism"The Journal of Biological Chemistry. (発表予定). (2004)

URL: 

公開日: 2005-04-18   更新日: 2016-04-21  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi