| 研究概要 |
(1)リボザイム法によるグラフト肝MHC抗原の発現の抑制による移植肝拒絶反応制御に関する研究:in vitroにおける実験
ラットMHCクラスI遺伝子であるRT1.A^aのアミノ酸配列より、有効にRNA切断活性をもつと予想されるリボザイムを設計し、発現ベクターに組み込みんだ。次にドナーPVG.R8ラットの大動脈内皮細胞のprimary culutureを樹立し、その培養細胞に導入し、導入後のRTlA^a抗原の発現の抑制をRTlA^aモノクローナル抗体を用いたフローサイトメトリーで評価した。さらに、MHCクラスIのみ相違するレシピエントPVG.1Uラットの脾細胞をエフェクターとして細胞障害活性を測定し、最も有効にRT1.A^aの発現を抑制し得たリボザイムを選択を試みた。しかしながら、RTlA^a抗原の発現の抑制及び、細胞障害活性の抑制効果はごくわずかであった。現在のところ、リボザイムの高次構造を考慮した設計を思案している。
(2)肝切除後の血管増殖因子の発現と類洞内皮細胞再生機序に関する研究:
Wistar系ラットに70%肝切除を行い、再生肝組織よりmRNAを分離し、RT-PCR法を用いてAng1,Ang2,及びTIE2のmRNAの発現の推移を検討。再生肝組織をコラーゲナーゼ灌流・エルトリエーションローターを用いて、肝細胞,類洞内皮細胞、Kupffer細胞および星細胞をそれぞれ分離・培養し、それらよりmRNAを分離し、ノーザンブロット法を用いて,Ang1,Ang2,及びTIE2のmRNAの発現を評価した。現在までの実験結果より、類洞内皮細胞の増殖後には、血管内皮細胞の分化を誘導するAng-1の産生が増強、さらに肝切除120-144時間においてIto細胞からAng-2の産生が亢進を認めるものの、肝細胞からのVEGFの産生はなく、これが類洞内皮細胞のapoptosisを誘導し、類洞内皮細胞の増殖調節、類洞のリモデリングを調節していると考えた。
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