| 研究課題/領域番号 |
14571226
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
藤田 知信 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20199334)
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| 研究分担者 |
北島 政樹 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (90112672)
鈴木 ゆり子 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (40255435)
河上 裕 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50161287)
北川 雄光 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20204878)
渡邊 昌彦 慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (80146604)
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| キーワード | MSI大腸癌 / 変異ペプチド / 免疫療法 / 癌抗原 / フレームシフトタンパク / TGFBRII |
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| 研究概要 |
1.MSI陽性大腸癌患者の腫瘍組織、血清、末梢単核球の採取と保存およびMSI陽性大腸癌細胞株の樹立。
同意の得られた大腸癌患者より腫瘍組織から、マクロサテライト不安定性(Microsatellite instability, MSI)の解析を行い、1例の大腸癌組織にMSIを認めた。この患者の血清および末梢単核球を保存し、癌細胞の培養を行ったが、細胞株の樹立はできなかった。
2.MSI陽性大腸癌においてタンパク翻訳領域内反復配列フレームシフト変異を認める遺伝子の検索および抗原候補分子の検索
文献データをもとに、MSI陽性大腸癌において翻訳領域内反復配列にフレームシフト変異を認める遺伝子の頻度を検討した結果、MSI陽性大腸癌患者の10%以上において、変異の認められる遺伝子が36個存在した。これら遺伝子のうち翻訳領域内のフレームシフト変異により産生される変異ペプチドが15アミノ酸以上産生されると考えられる遺伝子を、変異抗原候補とすると、21個の遺伝子において変異ペプチドの産生が推測された。このうち、20%以上のMSI陽性大腸癌患者で変異が報告されている遺伝子、17個について解析を進めた。
3.候補遺伝子のMSI陽性大腸癌組織における変異のスクリーニング
上記の17遺伝子について収集した17例のMSI陽性大腸癌組織からゲノムDNAを抽出し、PCRで増幅後塩基配列を決定することにより変異を調べた。TGFBRIIは、15例、AIM2は12例、CASP5は11例、SEC63は8例、KIAA0977は8例、TAF1Bは6例に認められた。
4.候補遺伝子の組変え変異タンパクの作製
上記6種の変異遺伝子を大腸菌発現プラスミドベクター(pMALc2xおよびpET32)にサブクローニングし、大腸菌に発現させて組換え変異タンパクを作製した。現在、Western blot法を用いてこれらタンパクに対する患者血清中の1gG抗体の検出を行っている。
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