| 研究課題/領域番号 |
14571551
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
産婦人科学
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| 研究機関 | 山梨大学 (2003-2004)
山梨医科大学 (2002) |
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研究代表者 |
笠井 剛 山梨大学, 医学部附属病院, 講師 (20194699)
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| 研究分担者 |
星 和彦 山梨大学, 大学院・医学工学研究部, 教授 (20111289)
平田 修司 山梨大学, 大学院・医学工学研究部, 助教授 (00228785)
正田 朋子 山梨大学, 大学院・医学工学研究部, 助手 (50345716)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2004
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| キーワード | 白皮症 / DNAの微小欠失 / Hook-1 cDNA / 精子ベクター / ICSI / azhマウス |
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| 研究概要 |
本研究の目的は、マウスを実験動物として、精子ベクターを用いた遺伝子導入法を用いてDNAの変異や欠失に基づいた遺伝性疾患の治療方法の確立を試みようとするものである。この目的で、当初は、マウス遺伝性疾患のモデルとして、アルビノ(白色)マウスであるBALB/cマウスを用い、遺伝子治療によってDNAの点変異を修復することにより「白皮症」の治療を試みることとし、これに加え、本年度より、DNAの微小欠失を修復するモデルとして、単一遺伝子の部分欠失によって精子に形態異常が生ずるazhマウスを用いることとした。このマウスは、第4染色体上のHook-1遺伝子のエキソン10および11が欠失したもので、azh-/-のオスは精子の形態異常により不妊となる。本年度は、マウスwild type Hook-1 cDNAをクローニングし、精原細胞で発現可能なベクターに挿入した。さらに、このコンストラクトをマウス精巣の精原細胞へ効率的に遺伝子導入する方法を検討した。また、azhマウスのHook-1遺伝子の欠損部分を含むゲノムDNAをクローニングした。精子形成細胞に特異的に発現するマウスHook-1遺伝子のpromoter領域をクローニングし、その下流にYFP cDNAを接続したpHK-YFPを構築し、8週齢の雄マウス精巣に麻酔下に注入し、電氣穿孔法によりin vivo遺伝子導入を行い、1週間後に屠殺し、精管細胞内のYFP陽性細胞を解析したところ、一部の細胞にYFPの発現が認められた。本法により、Hook-1遺伝子promoterを用いることにより、精子形成細胞にのみ特異的に外来遺伝子を発現させることがあきらかになった。このことは、精子ベクターを用いた遺伝子導入法を用いてDNAの変異や欠失に基づいた遺伝性疾患の治療方法の確立の一つの足掛かりとなると考えられる。
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