| 研究課題/領域番号 |
14571591
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| 研究機関 | 藤田保健衛生大学 |
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研究代表者 |
山田 和代 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 講師 (90080217)
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| 研究分担者 |
杉浦 真弓(小笠原 真弓) 名古屋市立大学, 医学部, 助教授 (30264740)
小川 久光 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (80101658)
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| キーワード | 転写因子 / 胎盤 / GCMタンパク / モノクロナル抗体 |
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| 研究概要 |
大腸菌に強制発現させたhGCMa/1タンパクを精製し、これを抗原として特異的抗体(ウサギポリクローナル)を作製した。この抗体はWestern法で大腸菌や昆虫細胞(sf 9)に強制発現させたhCMa/1や、ヒト胎盤のhGCMa/1だけでなく、マウス胎盤の同タンパクを認識した。この抗体を使って、1)hGCMa/1は胎盤のcholionic villiにのみ存在していること、hGCMa/1とhGCやエストロゲン合成酵素の局在が一致していることが明らかとなった。これは、本因子が、発達した胎盤がつくるhGCやエストロゲン合成酵素等のタンパクの発現を支配するというこれまでの研究成果(Yamada et al.J.Biol.Chem.1999 274 32279-32286)をつよく支持するものである。しかし、ポリクロナル抗体では今後の継続的な使用に難があるため、同タンパクに対するマウスモノクローナル抗体の作成を試みた。この結果、2)大腸菌や昆虫細胞(sf 9)に強制発現させたhGCMa/1、並びにヒト、マウスの内因性のGCMa/1を認識するモノクロナル抗体を2株、得ることができた。これらモノクロナル抗体の詳細な性質については現在検討中である。3)この抗体がマウスタンパクも強く認識することから、マウスでの胎盤以外の組織での発現について検討した。さらに4)ヒトCancer Arrayを用いて、ヒトの正常、腫瘍組織での本タンパクmRNAの発現状況について検討した。この結果、hGCMa/1,mRNAの発現はきわめて局在しており、正常組織では胃や卵巣サンプルの一部に見られるのみであった。またつよく発現している直腸ガンが一例あった。
5)GCMのニワトリのオーソログをクローニングし、ニワトリでも、発生時の胎児外組織に局在することを見つけ、機能の共通性が示唆された。
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