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【目的】腫瘍壊死因子であるTNF-αは、多くの細胞種において耐性を示す事が報告されている。TNF-αはFasなどと共にアポトーシスシグナルを活性化するが、それと同時に生存シグナルも活性化され、これが耐性の原因と考えられている。この生存シグナルとしてNF-κBが報告されているが、詳細は不明である。今回、このTNF-αに耐性を示す悪性黒色種細胞株BL-6において、PKCを阻害する事でこのTNF-αの耐性を克服する事を見い出すとともに、その耐性機序の解明を試みた。
【方法】B16melanomaBL-6細胞を使用し、PKC、Akt、MEK及びP-38を阻害後、TNF-αによる細胞死をWST-8法により測定した。また、H7によりPKC阻害後のNF-κB、MEK及びJNKの活性をウエスタンブロット法により検出した。
【結果および考察】BL6細胞にTNFαを添加しても、その増殖に全く影響を及ぼさなかった。しかし、PKC阻害剤であるH7処理後TNF-αを作用させた結果、ほとんどの細胞において細胞死を誘導した。この時、NF-κBは活性化していた。そこで生存に関わるシグナルを検討した結果Akt、ERKの減少が認められ、特にERKのリン酸化の減少が著しい結果を示した。そこで、Akt阻害剤であるLY処理後、MEK阻害剤であるUO126処理後、それぞれにTNF-αを投与すると、細胞死を誘導した。また、この時、生存シグナルとして働くNF-κBについてはPKC阻害に伴うタンパク発現に大きな変化が認められなかった。このことからBL-6細胞のTNF-αに対する耐性は、Aktの生存シグナル、と特にPKC、Raf及びMEKを介した生存シグナルが重要である事が認められた。現在、NF-κBを含め関連シグナルをより詳細に検討中である。
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