| 研究概要 |
家兎を用いた実験的後部硝子体剥離の検証
白色家兎を用いた実験モデルにおいて、後部硝子体剥離(PVD)作成に対するplasminの効果を検証した。白色家兎にヒトより精製したplasminを2IU注入し15、30、60分後に観察した。検眼鏡的検査、超音波検査にて硝子体の高度な液化、PVDを疑わせる所見が観察された。その後行った通常通りの硝子体手術においても、硝子体の高度な液化、PVDを確認できた。次にPlasmin注入による毒性に関して検証を行った。網膜機能面の評価として術後1週間,1ヶ月後に網膜電図、その後眼球摘出し、組織学的観察を行った。ともに特に問題はなく、plasmin注入に伴う網膜への影響はほとんどないと思われる。さらに網膜下へPlasminを注入し、術後1週間,1ヶ月後に組織学的観察を行ったが、網膜構造は全層にわたり正常に保たれていた。
Plasminを用いた硝子体手術への臨床応用
倫理委員会による承認を得た上で、患者より同意の上40mlの静脈血を採取し、Lysine-Sepharoseカラムによるアフィニティクロマトグラフィを行い、plasminogenを分離する。抽出した後、濃縮し、0.5mlにした上で、0.22μmのフィルタにて濾過し、-80℃で凍結保存した。感染の有無はサンプルの一部を用いて、当院中央検査部において確認した。精製plasminogenに2,500IUのurokinaseを加えplasminへと活性化させ、plasmin活性量はD-va1-leu-lys-p-nitroanilideを基質とし、スペクトロフォトメーターにて決定した。この方法で本年度35名の患者からPlasminを精製し、平均12(8〜21)IUの活性を得ることができた。この数値はplasminを硝子体中へ注入する際に、十分な効果を期待できる値である。また感染は認めず、安全性も問題ないと思われる。以上より自家血からのplasminの精製に関しては、安全かつ効率よく行う系を確立したと考える。
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