| 研究課題/領域番号 |
14571688
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
篠崎 和美 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (10256521)
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| 研究分担者 |
大和 雅之 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (40267117)
高村 悦子 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (90197202)
堀 貞夫 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (20143498)
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| キーワード | 温度応答性培養皿 / ヒト角膜包皮細胞 / ヒト角膜実質細胞 / 細胞シート |
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| 研究概要 |
ヒト角膜上皮細胞を東京女子医科大学・先端生命研究所が開発した温度応答性培養皿を用いることにより、培養細胞のシート状での回収が可能となる。培養角膜上皮細胞のDNA合成能を促進することが知られているEGF、TGF-β、b-FGF、IGF-1などの成長因子の培養に適した濃度、組み合わせを検討した。回収ができたヒト角膜上皮細胞のシートは、光学顕微鏡では、角膜上皮細胞の重層化し、角膜上皮の形態を呈し、基底膜様組織が認められた。透過型電子顕微鏡では、表層細胞では微絨毛が認められた。さらに、角膜上皮に特異的なケラチン3の免疫染色を行い、陽性所見が認められた。ただし、回収された角膜上皮細胞のシートの細胞の状態が、シートにより差を認める。また、回収されたシートでの幹細胞の存在は、認めているが、維持、機能については明らかでない点がある。
また、ヒト角膜上皮細胞を重層化させるためにマイトマイシン処理を行った。3T3と共培養をしているが臨床応用を考慮した場合、ヒト角膜実質細胞などで代用できることが望ましい。ヒト角膜実質細胞との共培養でも重層化したヒト角膜上皮細胞のシート作製を試みた。臨床応用をするまでに至っていない。
一方、ヒト角膜実質の培養では、角膜実質細胞によるシートの回収はできたが、透明性や膠原繊維の規則正しい配列をもったシートや十分な厚みを有する生体の実質層に代わるようなシートは、現在のところ得られていない。
使用したヒト角膜上皮細胞は、アメリカアイバンクのヒト角膜細胞を使用した。
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