| 研究課題/領域番号 |
14571693
|
|---|
| 研究機関 | 名城大学 |
|---|
研究代表者 |
中澤 清 名城大学, 薬学部, 助教授 (60076750)
|
|---|
| 研究分担者 |
高橋 郁子 名城大学, 薬学部, 教務技師補 (10200784)
|
|---|
| キーワード | keratan sulfate / chondroitin sulfate / chick cornea / chondroitin sulfotransferases / N-acetylglucosamine 6-sulfotransferase / chondroitin synthase / β-galactosyltransferase / cDNA cloning |
|---|
| 研究概要 |
角膜は、その透明性が他の組織には見られない大きな特徴である。角膜におけるこの透明性には、角膜実質の主成分の一つであるプロテオグリカン(PG)が重要な役割を果しているといわれている。当研究室ではここ2年、ヒヨコ角膜を実験材料に、PGの糖鎖部分であるグリコサミノグリカン糖鎖の合成に関与する糖転移酵素や硫酸転移酵素のcDNAのクローニングに研究を集中してきた。
(1)chondroitin 4-sulfotransferase(CH4ST)とchondroitin 6-sulfotransferase(CH6ST)のcDNAのクローニング:角膜実質細胞からchondroitinの硫酸化に関与する2つの酵素CH4STとCH6STのcDNAのクローニングを試みた。この内、CH4STは角膜分化のマーカー酵素になると考えている。CH6ST cDNAについてはその読み取り枠の塩基配列がほとんど決定され、これまで報告されているchick chondrocyteのCH6STと同一であることがわかった。一方CH4ST cDNAについても、最近その読み取り枠の大部分の塩基配列が決定された。その塩基配列はmouse brainやhuman brainのCH4ST(C4ST-1)cDNAとそれぞれ84.0%と86.0%の相同性を示した。
(2)N-acetylglucosamine 6-sulfotransferase(GlcNAc6ST)のcDNAのクローニング:GlcNAc6STはKS糖鎖の硫酸化に関与する酵素であり、角膜分化のマーカー酵素になることが示唆されている。そのcDNAのクローニングを試みてきたが、最近ようやくその読み取り枠の2/3の塩基配列が決定された。その配列は意外にも、humanの角膜に特異的に発現するGlcNAc6STとは相同性を示さず、human fetal brainのGlCNAc6ST(CS-2)と83%の相同性を示した。この結果はKS硫酸化に関与する。sufotransferaseの分子進化を考えるとき興味深い。
(3)chondroitin synthaseとβ-galactosyltransferase(Gal-T)のcDNAのクローニング:CS糖鎖、KS糖鎖の伸長に関与するchondroitin synthaseとGal-Tは角膜実質細胞の脱分化あるいはtransdifferentiaionのマーカーになるのではないかと考えている。両酵素のcDNAのクローニングを試み、chondroitin synthase cDNAについては、その読み取り枠のほとんどの塩基配列が決定できた。その配列はhuman brain chondroitin synthase cDNAと82%の相同性を示した。一方Gal-T cDNAについては、読み取り枠の2/3の塩基配列が決定された。その配列は、以前に報告されているヒヨコ角膜Gal-T1 cDNAと同一であった。
|
