| 研究課題/領域番号 |
14571723
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
形成外科学
|
|---|
| 研究機関 | 日本医科大学 |
|---|
研究代表者 |
水野 博司 日本医科大学, 医学部, 講師 (80343606)
|
|---|
| 研究分担者 |
伊吾田 慎一 日本医科大学, 医学部, 助手 (30339361)
村上 正洋 日本医科大学, 医学部, 講師 (00239500)
百束 比古 日本医科大学, 大学院・医学研究科, 教授 (00165135)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2002 – 2004
|
| キーワード | 間葉系幹細胞 / 脂肪 / 再生医学 / 組織工学 |
|---|
| 研究概要 |
当初ヒト由来脂肪組織幹細胞を用いての研究を予定していたが十分な検体数の確保が困難と判断し、GFPトランスジェニックマウス皮下脂肪を用いての研究に変更し、まずin vitroにおいてヒト由来脂肪組織幹細胞と同様の性質を有する幹細胞が存在することを確認した。
このGFPトランスジェニックマウス由来脂肪組織幹細胞(Adipose derived Stem Cells、以下ASC)を精製分離しコントロール培地内で増殖させた。第2継代ASCを脂肪分化誘導培地内で1週間培養後、各種担体(ポリグリコール酸不織布、I型コラーゲンスポンジ、ヒアルロン酸、フィブリン糊)に混合播種しヌードマウス皮下に移植した。そして移植後4週および8週後に肉眼的観察、蛍光顕微鏡による観察、組織学的評価(HE染色、Oil Red O染色)を行った。分化誘導をかけなかったASCと担体の混合物移植群および無細胞の担体移植群をコントロール群とした。
その結果、ASCとフィブリン糊の混合移植群において、再生された組織は肉眼的には黄色半透明の丸い形状を有し周囲には軽度の血管新生を伴っていた。この組織を蛍光顕微鏡下で観察すると緑色の蛍光を強く発しており、移植されたASCが生存し組織再生に寄与していることが認められた。組織学的には小型の脂肪滴を有する細胞がHE染色において確認され、Oil Red O染色において赤色に濃染される脂肪滴が確認できた。更に蛍光顕微鏡による組織観察ならびにGFPに対する免疫染色において陽性細胞が脂肪組織に再生していたことが確認された。またその他の担体を用いた実験においては、I型コラーゲンスポンジに播種したASCが脂肪組織再生に有用であったが、その他の担体においては明らかな脂肪組織再生は認められなかった。
現在ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γ(PPARγ)mRNA発現をRT-PCRにて確認中である。
またドナーの性差が脂肪への分化に与える影響についてPPARγ2遺伝子の発現をリアルタイムPCRにて検討したところ、雌由来の細胞は雄由来の細胞に比較して約1.54倍のPPARγ2遺伝子を発現しており、雌由来ASCが脂肪細胞への分化能が高いことがわかった。
|
