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2004 年度 研究成果報告書概要

DNAマイクロアレイを応用したヒト顎関節滑膜細胞の病態遺伝子の解析

研究課題

研究課題/領域番号 14571915
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 外科系歯学
研究機関日本大学

研究代表者

小倉 直美  日本大学, 松戸歯学部, 講師 (10152448)

研究分担者 平塚 浩一  日本大学, 松戸歯学部, 講師 (80246917)
研究期間 (年度) 2002 – 2004
キーワード顎関節内障 / 培養ヒト顎関節滑膜細胞 / CeneChip / interleukin-1β / Pathway analysis
研究概要

近年、顎関節内視鏡やMRI技術の進歩により、顎関節疾内障患部の状態を把握することが可能となった。また、滑液解析から疾患部で上昇している因子も報告されているが、顎関節部の細胞分子生物学的レベルでの研究は進んでいない。一方、ゲノム科学の進歩に伴い、GeneChipやDNA microarrayが開発され、一度に多数の遺伝子発現を検索することが可能となった。本研究では、顎関節内障患者滑液中で上昇しているIL-1βにてヒト顎関節滑膜細胞(滑膜細胞)を刺激した時の遺伝子発現変動をGeneChipにて検索した。5名の顎関節内障患者の手術時に採取した滑膜よりout growth法にて滑膜細胞を得た。IL-1βを4時間作用させた後total RNAを抽出、cRNAを作成した。cRNAをGeneChip Human Genome Focus Arrayにhybridization後、8,500の遺伝子の発現量を検索した。IL-1β刺激および無刺激の滑膜細胞5例の遺伝子発現解析はGeneSpringにて行った。Anova解析でIL-1βにより発現量に有意差があった遺伝子は170遺伝子、up-regulateは139遺伝子、down-regulateは31遺伝子であった。最も上昇率の高い遺伝子はchemokineであるCCL20で、170遺伝子中chemokineは9遺伝子存在していた。このchemokineの遺伝子発現をreal-time PCRにて確かめたところ、IL-1βによる上昇率はGeneChipの結果と類似していた。さらに、この170遺伝子についてIngenuity Pathway解析を行ったところ、6つのNetworkが作成され、NFkBの活性化により種々の遺伝子発現が上昇していることが示された。以上の結果から、IL-1βは顎関節部の炎症亢進に関与していることが示唆された。

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公開日: 2006-07-11  

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