| 研究概要 |
1.正常p53遣伝子の頭頚部扁平上皮癌(HNSCC)細胞への導入および導入後の細胞のcharacterization
前年度ではp53遺伝子変異のあるHNSCC細胞株に正常p53を導入して導入されたクローンの培養増殖を図ったが,導入された数種類のHNSCC細胞株のすべてはクローンの増殖を示さなかったので,テトラサイクリン刺激による導入遺伝子プロモーターの活性化システムを用い研究を進めた.本年度の研究では、癌抑制遣伝子であるp53遺伝子にpoint mutation(Exon 6,codon1 96CGA(Arg)→TGA(Stop),codon199GGA(Gly)→GTA(Val))を認めた口腔扁平上皮癌樹立培養細胞に、wild-type p53遺伝子を導入することにより、テロメラーゼ活性の発現に対する影響を検討した。[方法]p53-ptetO7-CMV-Lのベクターを作製し、lipofection法を用いて口腔扁平上皮癌(HNSCC2)へ遺伝子導入した。今回、テトラサイクリン刺激によって導入されたp53遺伝子の発現を誘導し、その時のTRAP assay法によるテロメラーゼ活性の発現と、RT-PCRによるhTERT mRNAの発現を観察した。
[結果と考察]TRAP assay法において、wild-type p53遺伝子の発現誘導によりテロメラーゼ活性の低下が確認された。同時に、RT-PCRにおいて、hTERT mRNAの発現の低下が確認された。本実験結果からwild-type p53遺伝子が口腔扁平上皮癌において、hTERT mRNAの発現及びテロメラーゼ活性の制御に関与することが示唆された。
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