| 研究課題/領域番号 |
14571992
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
歯周治療系歯学
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| 研究機関 | 鶴見大学 |
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研究代表者 |
深江 允 鶴見大学, 歯学部, 教授 (40064373)
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| 研究分担者 |
安藤 準 鶴見大学, 歯学部, 助手 (00282765)
田辺 孝子 鶴見大学, 歯学部, 講師 (00089393)
大井田 新一郎 鶴見大学, 歯学部, 助教授 (10114745)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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| キーワード | エナメルタンパク / 歯周組織分化誘導物質 / 新生幼若エナメル質 / シースプロテイン / リコンビナント |
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| 研究概要 |
エナメルタンパクに歯周組織再生能があり、既に臨床応用されているが、エナメルタンパクは多成分系であるため、安全で効率の良い臨床結果を得るにはエナメルタンパクから歯周組織再生促進因子を分離する必要がある。
ブタの幼若エナメル質から抽出したエナメルタンパクを使って、動物実験で歯周組織再生能を調べたところ、形成されてから時間が経過した幼若エナメル質よりは、形成されて間もなくの新生幼若エナメル質から抽出したエナメルタンパクに強い活性が認められた。そこで、新生幼若エナメル質から抽出したエナメルタンパクをアルカリ溶液中でセファデックスG-100のカラムでゲル濾過して分画し、活性を調べると、低分子が会合している最初に溶出する画分に活性があった。この画分には89kDaエナメリン、20-25kDaアメロゲニン、13-17kDaシースプロテインが含まれていた。この会合体は6M尿素中でのイオン交換、4Mグアニジン中でのゲルろ過などで分離したが、そのうちシースプロテインに一致して活性があることがわかった。一般の分化因子は通常のタンパク化学的にはタンパクバンドとして検出される程量的に多くないので、このタンパク質の生理活性を確認するためには、リコンビナントを作製することが必要と考えられた。
シースプロテインのリコンビナントはPCR法でそのDNAをつり上げて増幅し、クローニング用のTベクターにライゲーションして大腸菌に挿入した。大腸菌を培養したのち、Tベクターを分離し、さらにタンパク質発現ベクターにライゲーションして大腸菌に挿入した。タンパク質の発現はシースプロテインの抗体を使用してウェスタンブロットで調べているが、今のところ、リコンビナントのシースプロテインが得られていない。
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