| 研究概要 |
本研究ではヒトシアル酸転移酵素遺伝子群のうちα2,3-シアル酸転移酵素遺伝子ファミリーについてその発現調節機構を明らかにすることを試みた。α2,3-シアル酸転移酵素遺伝子ファミリーにはhST3Gal IからhST3Gal VIまでの6種類がある。このうち、申請者はすでにhST3Gal I、hST3Gal VI、hST3Gal IVについては転写開始点と遺伝子構造を明らかにしている。その結果、hST3Gal VIとhST3Gal IVは複数のプロモーターを有してた。そこで、本研究ではこれらの組織特異性や組織固有の調節機構を明らかにすることを試みた。さらに、その他の遺伝子についてその転写開始点とプロモーター構造を明らかにし、発現調節機構の解明を試みた。
1)hST3Gal II, IIIの転写開始点とプロモーター構造の解析
これらの遺伝子を発現している細胞からmRNAを抽出し5'-RACE法などで転写開始点を決定する。次に、転写開始点より上流のゲノム構造を明らかにし、複数のプロモーターを有するかを明らかにした。
2)hST3Gal IVの精巣特異的転写調節機構の解明
hST3Gal IVには5'非翻訳領域だけが異なる6種類(A1,A2,B1,B2,B3,BX)の転写産物が存在する。これらの転写産物はそれぞれ異なったプロモーター、pA, pB1,pB2,pB3,pBXから転写される。A typeの発現は精巣と卵巣、胎盤に限られている。したがって、pAプロモーターはこれらの細胞に特異的と考えられる。また、このプロモーターはこれら組織固有の発現調節に関与していると予想される。そこで、本研究では精巣由来の細胞株NEC-8や卵巣由来の細胞株TNK-nutなどを用いてpAプロモーターの組織特異性、特に精巣特異的転写調節機構について主にルシフェラーゼアッセイを用いて検討した。そして、精巣固有の発現調節にpAプロモーターがどのように関与していることを明らかにした。
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