ヒト染色体導入マウスによる腫瘍関連抗原に対するヒトモノクローナル抗体の作製と応用

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14572195
• 研究機関: 福岡大学
• 研究代表者: 黒木 政秀 福岡大学, 医学部, 教授 (40122692)
• 研究分担者: 芝口 浩智 福岡大学, 医学部, 助手 (60295061) ; 黒木 求 福岡大学, 医学部, 講師 (10131822)
• キーワード: 腫瘍関連抗原 / 癌胎児性抗原 / CEA / モノクローナル抗体 / ヒトモノクローナル抗体 / 免疫療法 / ADCC / CDC

研究概要

異種動物由来のモノクローナル抗体をヒトに投与する場合の抗原性を解決するため、キメラ抗体やヒト化抗体などが開発されてきた。しかしそれらは弱いながらなおヒトに抗原性を示す。そこで今回我々はヒト抗体遺伝子を導入したKM Mouse^<TM>を用い、癌胎児性抗原(CEA)に対する完全なヒトモノクローナル抗体(HmAb)を作製し、その免疫化学的性状を解析した。またHmAbのCEA発現癌細胞に対する抗体依存性細胞傷害活性(ADCC)および補体依存性細胞障害活性(CDC)について検討した。
CEAで免疫したKM Mouse^<TM>の脾臓細胞とマウスミエローマ細胞株を常法により細胞融合させ、CEAおよびCEA遺伝子ファミリータンパク(CEACAM)を用いて抗CEA抗体産生ハイブリドーマクローンをスクリーニングした。ヌードマウス腹水より得られた抗体を精製し、ELISA、FACSおよびBIAcore systemにより解析した。作製したHmAbのうちCEAとのみ特異的に反応するグループの中から、affinitiyが高い抗体を選び、CEA発現ヒト癌細胞株に対するADCCとCDCの活性を調べた。
46個の抗CEA HmAbを得た。それらはFACSによる解析でCEAとのみ反応するもの22個、CEACAM6(NCA)とも強く交差反応するもの14個、CEACAM6とも弱く反応するもの9個、およびCEACAM1(BGP)と交差反応するもの1個の計4つのグループに分けられた。癌細胞株に対するADCCはともにE/T ratio 20において40〜65%の傷害活性を示した。また,CDCも抗体濃度依存性に傷害活性を認めた。以上の結果より、抗CEA HmAbを用いた副作用の少ない癌の免疫療法への応用が示唆された。平成15年度は、SCIDマウスを用いてin vivoの抗腫瘍効果について検討する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Khare, P.D., Liao, S., Hirose, Y., Kuroki, Mo., Fujimura, S., et al.: "Tumor growth suppression by a retroviral vector displaying scFv antibody to CEA and carrying the iNOS gene"Anticancer Res.. 22・4. 2443-2446 (2002)
• [文献書誌] Zhao, L., Xu, S., Peterson, C., Kuroki, Mo., Kuroki, Ma., Venge, P., et al.: "Purification and characterization of a 95 kDa proteinÅ_o Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 8Å_o from normal human granulocytes"J.Immunol.Methods. 270・1. 27-35 (2002)
• [文献書誌] Yamauchi, Y., Kuroki, Mo., Imakiire, T., Uno, K., Abe, H., Beppu, R., et al.: "Opposite effects of thrombospondin-1 via CD36 and CD47 on homotypic aggregation of monocytic cells"Matrix Biol.. 21・5. 441-448 (2002)
• [文献書誌] Abe, H., Kuroki, Mo., Imakiire, T., Yamauchi, Y., Yamada, H., et al.: "Preparation of recombinant MK-1/Ep-CAM and establishment of an ELISA system for determining soluble MK-1/Ep-CAM levels in sera of cancer patients"J.Immunol.Methods. 270・2. 227-233 (2002)
• [文献書誌] Bjerner, J., Lebedin, Y., Bellanger, L., Kuroki, Ma., Shively, J.E., et al.: "Protein epitopes in carcinoembryonic antigen-Report from the ISOBM TD-8 workshop"Tumor Biol.. 23・4. 249-262 (2002)
• [文献書誌] Kuroki, Ma., Ueno, A., Matsumoto, H., Abe, H., Li, T., Imakiire, T., et al.: "Significance of tumor-associated antigens in the diagnosis and therapy of cancer : an overview"Anticancer Res.. 22・6. 4255-4264 (2002)
• [文献書誌] Kuroki, Ma., Yamauchi, Y., Beppu, R., Miyajima-Uchida, H., et al.: "Recent Research Developments in Immunology"Research Signpost, Korala(India)(S.G.Pandalai, ed.)(印刷中). (2003)