| 研究課題/領域番号 |
14580774
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
並木 淳 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20189195)
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| 研究分担者 |
島崎 琢也 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (00324749)
岡野 栄之 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (60160694)
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| キーワード | 神経幹細胞 / 神経再生 / 骨髄間質細胞 / Nestin / GFP / セルソーター |
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| 研究概要 |
Nestin遺伝子のsecond intron enhancerは神経幹細胞に選択的に発現を誘導するため、この遺伝子発現をenhanced green fluorescent protein (EGFP)で可視化したnestin-EGFPトランスジェニックマウス由来の細胞では、GFPの蛍光強度が神経幹細胞としての活性と相関する。GFPの蛍光陽性を指標に骨髄間質細胞(marrow stromal cell ; MSC)に神経幹細胞選択的nestin遺伝子の発現を誘導し、nestin-EGFP陽性MSCをセルソーターにより分離・濃縮した。神経幹細胞のneurosphere培養条件にBMPシグナルを抑制するためNoggin、あるいはLIFなどを添加し培養条件を検討した。現時点ではnestin-EGFP陽性MSCに、神経幹細胞の条件である中枢神経系多分化能と自己複製(増殖)能を獲得させるには至っていない。したがって蛋白発現レベルでのphenotypeを検討しMSC由来神経幹細胞の純化を試みた。
神経幹細胞選択的nestin遺伝子発現とNestin蛋白質発現の免疫組織学的検討によれば、GFP-/Nestin+の間葉系Nestin蛋白質陽性細胞、GFP+/Nestin+の中枢神経系由来と推測されるNestin蛋白質陽性細胞、さらにGFP+/Nestin-のnestin-EGFP遺伝子は発現しているがNestin蛋白質は陰性の細胞が存在した。フローサイトメーターを用いた細胞表面抗原の検討では、hematopoietic cellあるいはMSCでの発現が認められているCD31やCD44の接着分子はnestin-EGFP陽性MSCでは発現がみられず、また間葉系細胞の特徴であるfibronectin (CD49e)も陰性であり、細胞表面抗原を選別の指標に加えられる可能性が示された。
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