2003 年度実績報告書

脳内移動型および非移動型GnRHニューロンにおける新規遺伝子の単離

研究課題

研究課題/領域番号	14580777
研究機関	日本医科大学
研究代表者	PARHAR S.ISHWAR 日本医科大学, 医学部, 講師 (10271339)
研究分担者	佐久間康夫日本医科大学, 医学部, 教授 (70094307)
キーワード	GnRH / immunofluoresence / single-cell RT-PCR / micromanipulator / real-time PCR
研究概要	各GnRHサブタイプ遺伝子の中でも、特に進化的に保存されているGnRHタイプ2における遺伝子発現調節機構には、いまだ不明な点が多く残されている。これを明らかにするため、蛍光免疫組織化学的同定による解剖学的特異性と定量的リアルタイムRT-PCR法(RT-Q-RT-PCR法)による定量性を兼ね備えた新たな解析手法を確立した。この手法により、単一GnRHニューロンにおけるGnRH mRNAの発現および定量が可能となった。本研究では、RT-Q-RT-PCR法を用いて、性的に成熟および未成熟のティラピア(Oreochromis niloticus)の脳由来単一GnRHニューロンにおける、GnRHサブタイプ遺伝子のmRNAレベルの変動を調べた。GnRH1ニューロンの細胞あたりのGnRH1 mRNAレベル、0.05x10^2fg/cell以上のmRNAを発現しているニューロンの割合ともに、未成熟より成熟した雄の方が高かった(未成熟,4.7%;成熟,44.2%)。一方、GnRH2,GnRH3ニューロンでは、mRNAレベル、発現ニューロンの割合共に、未成熟、成熟間で差は認められなかった。蛍光免疫組織化学的に標識したGnRH単一細胞における定量的リアルタイムPCR法を用いた新規手法により、視床下部GnRH1は生殖腺の成熟に重要であることが示された。一方、GnRH2およびGnRH3はおそらく、生殖行動あるいは非生殖機能に補助的な役割を持つものと考えられた。さらに、本手法により単一GnRHニューロンにおける既知あるいは未知の遺伝子の同定および定量が可能であり、それによって、脊椎動物における複数種のGnRH細胞の生理を支配している各GnRH細胞間の複合的関連性について、その理解を一層深めることが出来ると期待される。 (Endocrinology(2003)144:3297-3300)

研究成果
(5件)

すべてその他

すべて文献書誌 (5件)

[文献書誌] Parhar IS, Sato H, Sakuma Y: "Ghrelin gene in cichlid fish is modulated by sex and development."Biochem.Biophy.Res.Commun.. 305(1). 169-175 (2003)
[文献書誌] IS.Parhar, S.Ogawa, T.Hamada, Y.Sakuma: "Single-cell real-time quantitive PCR for immunofluorescently identified neurons of GnRH subtypes."Endocrinology. 144(8). 3297-3300 (2003)
[文献書誌] Drennon K, Moriyama S, Kawauchi H, Small B, Silverstein J, Parhar I, Shepherd B.: "Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the Measurement of Plasma Growth Hormone (GH) Levels in Channel Catfish (Ictalurus punctatus) : Assessment of environmental salinity and GH-secretagogues on Plasma GH Levels."Gen.Comp.Endocrinol.. 133(3). 314-322 (2003)
[文献書誌] Ishwar S.Parhar, Tomoko Soga, Satoshi Ogawa, Yasuo Sakuma: "FSH and LH-β subunits in the preoptic nucleus : ontogenic expression in teleost."Gen.Comp.Endocrinol.. 132(3). 369-378 (2003)
[文献書誌] Miranda LA, Strobl-Mazzulla PH, Strussmann CA, Parhar I, Somoza GM.: "Gonadotropin-releasing hormone neuronal development during the sensitive period of temperature sex determination in the pejerrey fish, Odontesthes bonariensis."Gen.Comp.Endocrinol.. 132(3). 444-453 (2003)

2003 年度 実績報告書

脳内移動型および非移動型GnRHニューロンにおける新規遺伝子の単離

研究代表者

PARHAR S.ISHWAR 日本医科大学, 医学部, 講師 (10271339)

研究成果

[文献書誌] Parhar IS, Sato H, Sakuma Y: "Ghrelin gene in cichlid fish is modulated by sex and development."Biochem.Biophy.Res.Commun.. 305(1). 169-175 (2003)

[文献書誌] IS.Parhar, S.Ogawa, T.Hamada, Y.Sakuma: "Single-cell real-time quantitive PCR for immunofluorescently identified neurons of GnRH subtypes."Endocrinology. 144(8). 3297-3300 (2003)

[文献書誌] Ishwar S.Parhar, Tomoko Soga, Satoshi Ogawa, Yasuo Sakuma: "FSH and LH-β subunits in the preoptic nucleus : ontogenic expression in teleost."Gen.Comp.Endocrinol.. 132(3). 369-378 (2003)

[文献書誌] Miranda LA, Strobl-Mazzulla PH, Strussmann CA, Parhar I, Somoza GM.: "Gonadotropin-releasing hormone neuronal development during the sensitive period of temperature sex determination in the pejerrey fish, Odontesthes bonariensis."Gen.Comp.Endocrinol.. 132(3). 444-453 (2003)

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