| 研究課題/領域番号 |
14599007
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
矢尾板 芳郎 広島大学, 大学院・理学研究科, 教授 (00166472)
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| 研究分担者 |
中島 圭介 広島大学, 大学院・理学研究科, 助手 (60260311)
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| キーワード | 変態 / プログラム細胞死 / アポトーシス / 甲状腺ホルモン / 甲状腺ホルモン受容体 / 器官退縮 / matrix metalloproteinase / アフリカツメガエル |
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| 研究概要 |
発生過程には様々な器官が形成されると同時に不要な器官は退縮、縮小する。両生類幼生の変態では尾や鰓が甲状腺ホルモンの血中増加に伴い退縮する。私たちは幼生尾の筋細胞死はst62までは自殺的なものであり、st62以降の急激な尾の退縮に伴って他殺的な機構(細胞外基質分解酵素の増加により、細胞外基質が分解され細胞が足場を失い"他殺的"に起きると考えられる細胞死)も複合的に作用しているということを示した。また、退縮する尾において他殺的機構の主な担い手と考えられている細胞外基質分解酵素の阻害剤は、細胞外基質で構成されている脊索の崩壊を防ぐが、尾の退縮を部分的にしか抑制しない。このことは筋細胞等は甲状腺ホルモンにより直接、自殺で死ぬことを支持する。
今年度は、前年度のsubtraction library、differential hybridizationで単離された2クローンの全長cDNAをクローニングし、解析した。甲状腺ホルモン処理でアポトーシスを起している尾由来の筋芽細胞株で、また、退縮中の尾で、発現が増加していることを確認した。どちらも、アクチン結合性の蛋白質であった。しかし、尾由来の筋芽細胞株でこれらの遺伝子を強制発現させても、細胞の生存率に変化が観察されなかったことから、自殺遺伝子とは考えられなかった。現在、テトラサイクリン誘導体で発現が増加するプロモーターの下流にcDNAを挿入することによって、cDNAライブラリーを作製し、約100個のクローンのプラスミドを幼生の尾の筋細胞に注入してリポーター遺伝子とともに発現させ、テトラサイクリン誘導体の存在下で飼育している。リポーター遺伝子の発現が処理後の細胞死により減少することを指標としてスクリーニングを行なっている。
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