| 研究課題/領域番号 |
14656114
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
佐々木 義之 京都大学, 農学研究科, 教授 (10041013)
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| 研究分担者 |
山田 宜永 京都大学, 農学研究科, 助教授 (40253207)
谷口 幸雄 京都大学, 農学研究科, 助手 (10252496)
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| キーワード | モデル動物 / OLETF / QTL / コンジェニック / ENU-mutant / 脂肪蓄積 / ポジショナルキャンディデート / クローニング |
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| 研究概要 |
・肥満型OLETFラットでの筋肉内脂肪蓄積に関わる第一染色体上のQTLのポジショナルキャンディデートであるPnlip遺伝子について、〜9.8kbの5'上流隣接領域、〜13.1kbのエクソン/イントロン領域および〜3.6kbの3'下流隣接領域をOLETFとF344でダイレクトシーケンスし、多型について解析した。その結果、転写開始点の上流〜3.4kbの位置に、F344アリルに比べOLETFアリルにおいてサイズが長いVNTR多型が検出された。そこで、当該QTLで、OLETFとは異なるアリルを有することがQTL解析により判明しており、Pnlip遺伝子発現レベルがOLETFに比べ減少しているBNとLETOについても、上記多型部分のシーケンス解析を行った。その結果、OLETFより短くF344と同じサイズであり、Pnlip遺伝子についての発現レベルの増加がOLETF特異的であることに加えて、当該遺伝子のVNTR多型はOLETFに特異的な多型を示すことが明らかになった。Ins1遺伝子では、プロモーター領域に同様なVNTR多型が存在し、それが骨格筋、脂肪組織および膵での発現レベルに影響を及ぼすことで、量的形質である糖尿病発症につながっているらしいとの報告がなされており、今回の発見は興味深いものである。また、当該QTLのゲノム領域内で組み換えが生じている(コンジェニック×F344)×コンジェニックのバッククロス交雑群からの雄選抜個体12匹を用いることで、D1Rat90とD1Rat225の間の2.3cMの領域に当該QTLをファインマッピングした。さらに、上記新規組み換えパックスロス交雑個体を用いることで、ファインマッピングされた当該QTLがPnlip遺伝子のVNTR多型および発現レベルの変化と共分離していることが明らかにされた。これらの結果より、Pnlip遺伝子が筋肉内脂肪蓄積QTLの原因遺伝子であるかもしれないという状況証拠が得られた。
・ENU-mutantであるDBF1について、肥満・脂肪蓄積パラメーターである体重、生殖器脂肪量、腎周囲脂肪量および最長筋内脂肪量の解析を行ったところ、生殖器脂肪量および腎周囲脂肪量に対して最長筋内脂肪量が増加しているあるいは減少しているmutantマウスを検出することができ、家畜モデル動物としての有用性を検討する価値があると考えられた。
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