• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 課題ページに戻る

2003 年度 実績報告書

特殊ベント・プロモーターを利用した新規高発現ベクターの構築

研究課題

研究課題/領域番号 14657069
研究機関香川大学(医学部)

研究代表者

岡部 昭延  香川大学, 医学部, 教授 (20093677)

研究分担者 玉井 栄治  香川大学, 医学部, 助手 (40333512)
宮田 茂  香川大学, 医学部, 助手 (90314913)
松下 治  香川大学, 医学部, 助教授 (00209537)
キーワードClostridium perfringerns / ウエルシュ菌 / クロストリジウム / 発現ベクター / フェレドキシン / ベントDNA / シアリダーゼ / コラゲナーゼ
研究概要

ウエルシュ菌(Clostridium perfringens)のフェレドキシン遺伝子のプロモーターの上流域からプロモーター内部にかけて存在する5つの連続するPhased A-tractsは、新しいタイプのBent DNAであり、その折れ曲がり角度は110°と強い。上流3つのA-tractsと下流2つのA-tractsの相乗作用によりフェレドキシンのプロモーターを活性化することを明らかにした。この特殊なベント・プロモーターをC.perfringens/Escherichia coliのシャトル・ベクター兼プロモーター選択ベクターであるpPSVにクローン化し、高発現ベクターpFFを構築した。C.perfringens/pFF系の有用性を調べるために、C.perfringensの75kDaのシアリダーゼ(NanI)の構造遺伝子とpFFをTranscriptional fusionし、pFFNを構築した。対照として、nanI遺伝子の全領域を組み込んだベクターpPSVNを構築した。さらにAT-rich遺伝子の高発現系として開発されたE.coli BL21(DE3)CodonPlus-RILにおけるNanI産生能と比較するために、pUC19にnanIをクローン化した。C.perfringes/pFFNは、C.perfringens/pPSVNの60倍、大腸菌系の約15倍の産生を示した。培養液100mlから2段階精製法で約3mgの高純度のNanIが精製された。以上のことから、C.perfringens/pFF系はシアリダーゼの高発現系に有用であることが明らかとなった。pFFの有用性について、120kDaのコラゲナーゼ遺伝子についても同様に検討したところ、発現量の改善は見られたが、C.perfringens菌そのものを培養した時と同様に、分解産物も認められた。コラゲナーゼ産生のためには、今後Protease欠損の変異株の利用や培養条件などについて検討する必要があることが明らかとなった。

  • 研究成果

    (2件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (2件)

  • [文献書誌] Masato Kaji: "A novel type of DNA curvature present in a Clostridium perfringens ferredoxin gene : characterization and role in gene expression."Microbiology. 149・11. 3083-3091 (2003)

  • [文献書誌] Akihisa Takamizawa: "High-level expression of clostridiial sialidase using a ferredoxin gene promoter-based plasmid."Protein Expression and Purification. in press. (2004)

URL: 

公開日: 2005-04-18   更新日: 2016-04-21  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi