細胞表面に発現する分子シャペロン複合体の生理機能の解明

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14657078
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 斉藤 隆 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (50205655)
• キーワード: 分子シャペロン / NFAM / カルネキシン / キメラ分子 / NFAT / シャペロン

研究概要

本研究では、ERシャペロンであるカルネキシン(CNX)が細胞表面に発現しているという発見に基づいて、これがどのような分子と会合し、その機能は何か、を解析することを目的とした。これまで、カルネキシンは、TCRβ、pTαと会合することが解っていたが、今回、転写因子NFATを活性化する分子としてクローニングした新規遺伝子NFAM-Cが細胞表面でカルネキシンと会合することが判明し、NFAM-CとCNXの会合について解析した。
(1)NFAM-Cの細胞外ドメイン、細胞内ドメインをMHCクラスIと置き換えたキメラ分子を作製し、CNXとの会合を調べたところ、NFAM-Cの細胞外ドメインを介してCNXと会合していることが示された。そこで、細胞外ドメインのGST融合蛋白が会合するかどうかについても調べたが、ポジティブな結果は得られず、相互作用に立体構造が重要である可能性が示唆された。
(2)CNXが欠損している細胞株CEM-NKRにNFAM-Cをトランスフェクションし、NFAM-Cの発現がCNX依存性かどうかを解析した結果、CEM細胞でもNFAN-Cが細胞表面に発現することが判明した。この結果から、CNXとの会合は、NFAM-Cの細胞表面発現には不可欠でなく、より機能的な会合と考えられる。或いは、CEM細胞では、CNXの替わりに、異なるシャペロンが代用されている可能性も考えられる。
一方、CNX自体が細胞表面に発現するためには、糖鎖を持つ分子との会合が必要なことは、CNXの糖鎖結合ドメインを欠損させた変異CNXの細胞表面発現が顕著に低下することから明らかになった。
CNX-NFAM-C会合の生理的機能を検索するために、マクロファージの貧食能や、アポトーシスとの関係、細胞接着の可能性、など検討したが、現在までには明らかにすることができず、今後の検討課題となった。

研究成果

• [文献書誌] Itoh, K.: "Negative regulation of immune synapse formation by anchoring lipid raft to cytoskeleton through Cbp-EBP50-ERM assembly"J. Immunol.. 168・2. 541-544 (2002)
• [文献書誌] Azeredo da Silveira, S.: "Complement activation selectively potentiates the pathogenicity of the IgG2b and IgG3 isotypes of a high affinity anti-erythrocyte autoantibody"J. Exp. Med.. 195・6. 665-672 (2002)
• [文献書誌] Ioan-Facsinay, A.: "FcγRl (CD64) contributes substantially to severity of arthritis, hypersensitivity responses and protection from bacterial infection"Immunity. 16・3. 391-402 (2002)
• [文献書誌] Yokosuka, T.: "Predominant role of T cell receptor α chain in forming preimmune TCR repertoire revealed by clonal TCR reconstitution system"J. Exp. Med.. 195・8. 991-1001 (2002)
• [文献書誌] Murata, Y.: "The conversion of redox status of peritoneal macrophages during pathological progression of spontaneous inflammatory bowl disease in Janus family tyrosine kinase 3-/-and IL-2Rγ-/-mice."Int. Immunol.. 14・6. 627-636 (2002)
• [文献書誌] Redegeld, F.A.: "Immunoglobulin free light chains elicit immediate hypersensitivity-like responses"Nat. Med.. 8・7. 694-701 (2002)
• [文献書誌] Snell, D.C.: "Differential effects of reduced glycoprotein VI levels on activation of murine platelets by glycoprotein VI ligands"Biochem. J.. 368・Pt 1. 293-300 (2002)
• [文献書誌] Tarzi, R.M.: "Nephrotoxic nephritis is mediated by Fcγreceptors on circulating leukocytes and not intrinsic renal cells"Kidney Int.. 62・6. 2087-2096 (2002)
• [文献書誌] Matsumoto, K.: "Fc receptor-independent development of autoimmune glomerulonephritis in lupus-prone MRL lpr mice"Arthritis. Rheum.. 48・2. 486-494 (2003)
• [文献書誌] Yamasaki, S.: "Gads/Grb2-mediated association with LAT is critical for the inhibitory function of Gab2 in T cells"Moll. Cell. Biol.. (in press).
• [文献書誌] Arase, N.: "IgE-mediated activation of NK cells through FcγRIII"J. Immunol.. (in press).
• [文献書誌] Saito, T.: "Negative feedback of T cell activation through inhibitory adaptors and co-stimulatory receptors"Immunol. Rev.. (in press).