2002 年度実績報告書

マウス胚性幹細胞由来軟骨細胞をもちいた関節疾患の治療応用に関する検討

研究課題

研究課題/領域番号	14657119
研究機関	聖マリアンナ医科大学
研究代表者	鈴木登聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (40235982)
キーワード	胚性幹細胞 / 変形性関節症 / BMP / II型コラーゲン / Sox-9 / Pax-6 / 軟骨細胞 / 奇形膝
研究概要	本年度はマウスES細胞からの軟骨細胞の分化誘導の培養条件を決定した。まずマウスES細胞は胎児線維芽細胞との共培養により増殖させ十分量のES細胞を回収した。少数の細胞から培養を開始すると殆ど軟骨細胞の分化が認められないことから、軟骨細胞分化誘導には細胞の密度が重要な因子であることが明らかになった。マウスES細胞はゲラチンプレート上でbone morphogenetic protein (BMP)-2あるいはBMP-4と培養することで2-4週後には約半数がアルシアンブルー染色陽性、タイプ2コラーゲン陽性の軟骨細胞を分化誘導することができた。この細胞は軟骨細胞特異的な転写因子Sox-9やPax-1を発現した。この時点ではこの細胞集団は軟骨細胞以外にも様々な細胞集団を含んでいる。そこでこの細胞を重症複合免疫不全(SCID)マウス皮下に移植した。数週間から数カ月後には移植した細胞はSCIDマウス皮下で増殖し軟骨組織を形成した。状況によっては数mmの大きさまで増大し肉眼で十分認識できる大きさとなる。このステップは関節内移植に十分な軟骨細胞を得ることを可能にするとともに、混入する他の細胞集団にもin vivoで分化を誘導させ軟骨細胞との分離精製を可能にする。次に正常マウス膝関節内に濃塩酸を注入して関節軟骨を破壊し変形性関節症マウスモデルを作成した。1週間後にES細胞由来軟骨細胞の移植実験を行った。変形性関節症マウスでは膝関節の軟骨細胞は殆ど消失していた。ES細胞由来軟骨細胞移植マウスでは大腿骨と脛骨の関節面に軟骨細胞が生着していた。しかし、一部のマウスでは関節腔内に軟骨細胞の集塊が形成されており、移植する細胞数の決定が重要であると考えられた。しかし、現在まで長期生存させたマウスにおいてもES細胞由来の奇形種発生は認めていない。

研究成果
(25件)

すべてその他

すべて文献書誌 (25件)

[文献書誌] Kasiwakura J, Suzuki N, Takeno M, Itoh S, Oku T, Sakane T, Nakajin S, Toyosima S: "Evidence of autophosphorylationin Txk : Y91 is autophosphorylation site"Biol Pharm Bull. 25(6). 718-721 (2002)
[文献書誌] Takeba Y, Nagafuti H, Takeno M, Kasiwakura J, Suzuki N: "Txk, a member of non-receptor tyrosine kinase of Tec family, acts as a Th1 cell specific transcription factor and regulates IFN-gamma gene transcription"J Immunol. 168. 2365-2370 (2002)
[文献書誌] Mihara S, Suzuki N, Takeba Y, Soejima K, Yamamoto Y: "Combination of molecular mimicry and aberrant autoantigen expression is important for development of anti-Fas ligand autoantibodies in patients with SLE"Clin Exp Immuol. 129. 359-369 (2002)
[文献書誌] Nagafuchi H, Takeno M, Takeba Y, Miyagi T, Chiba S, Sakane T, Suzuki N: "Aberrant expression of Fas ligand on anti-DNA autoantibody secreting B lymphocytes in patients with systemic lupus erythematosus ; "immune privilege" like state of the autoreactive B cells"Clin Exp Rheumatol. 20. 625-631 (2002)
[文献書誌] Wakisaka S, Mihara S, Takeba Y, Takeno M, Yamamoto S, Suzuki N: "Aberrant fas ligand expression on lymphocytes in patients with Behcet's disease"Int Arch Allergy Immunol. 129(2). 79-84 (2002)
[文献書誌] Miyagi T, Takeno M, Nagafuchi H, Takahashi M, Suzuki N: "Flk1 positive cells derived from mouse embryonic stem (ES) cells reconstitutes hematopoiesis in vivo in SCID mice"Exp Hematol. 30(12). 1444-1453 (2002)
[文献書誌] Nagafuchi H, Shimoyama Y, Kashiwakura J, Takeno M, Sakane T, Suzuki N: "Preferential expression of B7.2 (CD86), but not B7.1 (CD80), on B cells induced by CD40/CD40L interaction is essential for the Anti-DNA Autoantibody Production in Patients with Systemic Lupus Erythematosus"Clin Exp Reumatol. 21. 71-77 (2003)
[文献書誌] Suzuki N, Takeno M, Inaba, G: "Bilateral subdural effusion in a patient with neuro-Behcet's disease"Ann Rheum Dis. (in press). (2003)
[文献書誌] Chiba S, Iwasaki Y, Sekino H, Suzuki N: "Motoneuron enriched neural cells derived from mouse ES cells reconstitute neural network to improve motor function of hemiplegic mice, a model of cerebral vascular diseases"Cell Transplant. (in press). (2003)
[文献書誌] 鈴木登, 山本仁, 小坂橋靖: "孤発生と考えられる進行性化骨性筋炎の一例"炎症・再生. 22(6). 555-559 (2002)
[文献書誌] 宮城司, 千葉俊明, 鈴木登: "再生医学"聖マリアンナ医科大学雑誌. 30. 121-129 (2002)
[文献書誌] 千葉俊明, 関野宏明, 鈴木登: "レチノイン酸を用いたマウス胚性幹細胞における神経上皮型幹細胞への分化誘導"炎症・再生. 22(6). 543-549 (2002)
[文献書誌] 鈴木登: "検査値異常から読む病態と診断計画リンパ球芽球化試験"臨床医. 28増刊号. 1169-1171 (2002)
[文献書誌] 武半優子, 岳野光洋, 柏倉淳一, 鈴木登: "ヒトTh1細胞特異的Tec familyチロシンリン酸化酵素、Txkの機能解析と各種自己免疫疾患における発現"炎症・再生. 22(5). 475-479 (2002)
[文献書誌] 千葉俊明, 鈴木登: "脳梗塞慢性期における移植治療"救急医学. 26(9). 1094-1098 (2002)
[文献書誌] 本間龍介, 鈴木登: "再生医療"Helth Science. 19(1). 78-79 (2002)
[文献書誌] 宮城司, 本間龍介, 鈴木登: "呼吸器系の生物学. 1.胚性幹細胞(ES細胞)と実験医学"Annual Review呼吸器2003. 1-9 (2003)
[文献書誌] Suzuki N: "The pathogenic role of prolactin in patients with rheumatoid arthritis. Neuroimmune Biology, vol.3 : Growth and lactogenic hormones"Ed by R Rapaport and Matera, Elsevier, Amsterdam, The Neitherlands. 297-304 (2002)
[文献書誌] Sakane T, Suzuki N: "Behcet's syndrome. The Moleular Pathology of Autoimmunity, Second Edition"Ed by A N Theofilopulos and C A Bona, Gordon and Breach Science Publishers, Pensylvania, USA. 828-840 (2002)
[文献書誌] Suzuki N, Takeno M, Takeba Y, Nagafuchi H, Sakane T: "Autoimmunity in Behcet's desease. Immunology of Behcet's disease"Ed by M Zierhut, S Ohno, Swets & Zeitlinger, Lisse, The Netherlands (in press). (2003)
[文献書誌] Takeno M, Simoyama Y, Nagafuchi H, Suzuki N, Sakane T: "Neurophil hyperfinction on Behcet's disease. Immunnology of Behcet's disease"Ed by M Zierhut, S Ohno, Swets & Zeitlinger, Lisse, The Netherlands (in press). (2003)
[文献書誌] Sakane T, Suzuki N: "Neuro-endocrine-immune axis in human rheumatoid arthritis"Autoimmunity Kluwer Academic Publishers, Wroclaw, Poland (in press). (2003)
[文献書誌] 鈴木登: "免疫不全の分子機構, わかりやすい内科学第2版"井村裕夫編, 文光堂. 310-313 (2002)
[文献書誌] 鈴木登, 宮城司: "膠原病類縁疾患に伴う関節炎(Behcet病など)「骨・関節疾患」"朝倉書店 (印刷中). (2003)
[文献書誌] 鈴木登: "全身性エリテマトーデス病因インフォームドコンセントのための図説シリーズ膠原病"医薬ジャーナル社 (印刷中). (2003)

2002 年度 実績報告書

マウス胚性幹細胞由来軟骨細胞をもちいた関節疾患の治療応用に関する検討

研究代表者

鈴木 登 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (40235982)

研究成果

[文献書誌] Kasiwakura J, Suzuki N, Takeno M, Itoh S, Oku T, Sakane T, Nakajin S, Toyosima S: "Evidence of autophosphorylationin Txk : Y91 is autophosphorylation site"Biol Pharm Bull. 25(6). 718-721 (2002)

[文献書誌] Takeba Y, Nagafuti H, Takeno M, Kasiwakura J, Suzuki N: "Txk, a member of non-receptor tyrosine kinase of Tec family, acts as a Th1 cell specific transcription factor and regulates IFN-gamma gene transcription"J Immunol. 168. 2365-2370 (2002)

[文献書誌] Mihara S, Suzuki N, Takeba Y, Soejima K, Yamamoto Y: "Combination of molecular mimicry and aberrant autoantigen expression is important for development of anti-Fas ligand autoantibodies in patients with SLE"Clin Exp Immuol. 129. 359-369 (2002)

[文献書誌] Wakisaka S, Mihara S, Takeba Y, Takeno M, Yamamoto S, Suzuki N: "Aberrant fas ligand expression on lymphocytes in patients with Behcet's disease"Int Arch Allergy Immunol. 129(2). 79-84 (2002)

[文献書誌] Miyagi T, Takeno M, Nagafuchi H, Takahashi M, Suzuki N: "Flk1 positive cells derived from mouse embryonic stem (ES) cells reconstitutes hematopoiesis in vivo in SCID mice"Exp Hematol. 30(12). 1444-1453 (2002)

[文献書誌] Suzuki N, Takeno M, Inaba, G: "Bilateral subdural effusion in a patient with neuro-Behcet's disease"Ann Rheum Dis. (in press). (2003)

[文献書誌] Chiba S, Iwasaki Y, Sekino H, Suzuki N: "Motoneuron enriched neural cells derived from mouse ES cells reconstitute neural network to improve motor function of hemiplegic mice, a model of cerebral vascular diseases"Cell Transplant. (in press). (2003)

[文献書誌] 鈴木登, 山本仁, 小坂橋靖: "孤発生と考えられる進行性化骨性筋炎の一例"炎症・再生. 22(6). 555-559 (2002)

[文献書誌] 宮城 司, 千葉俊明, 鈴木登: "再生医学"聖マリアンナ医科大学雑誌. 30. 121-129 (2002)

[文献書誌] 千葉俊明, 関野宏明, 鈴木登: "レチノイン酸を用いたマウス胚性幹細胞における神経上皮型幹細胞への分化誘導"炎症・再生. 22(6). 543-549 (2002)

[文献書誌] 鈴木登: "検査値異常から読む病態と診断計画 リンパ球芽球化試験"臨床医. 28増刊号. 1169-1171 (2002)

[文献書誌] 武半優子, 岳野 光洋, 柏倉 淳一, 鈴木登: "ヒトTh1細胞特異的Tec familyチロシンリン酸化酵素、Txkの機能解析と各種自己免疫疾患における発現"炎症・再生. 22(5). 475-479 (2002)

[文献書誌] 千葉俊明, 鈴木登: "脳梗塞慢性期における移植治療"救急医学. 26(9). 1094-1098 (2002)

[文献書誌] 本間龍介, 鈴木登: "再生医療"Helth Science. 19(1). 78-79 (2002)

[文献書誌] 宮城司, 本間龍介, 鈴木登: "呼吸器系の生物学. 1.胚性幹細胞(ES細胞)と実験医学"Annual Review呼吸器2003. 1-9 (2003)

[文献書誌] Suzuki N: "The pathogenic role of prolactin in patients with rheumatoid arthritis. Neuroimmune Biology, vol.3 : Growth and lactogenic hormones"Ed by R Rapaport and Matera, Elsevier, Amsterdam, The Neitherlands. 297-304 (2002)

[文献書誌] Sakane T, Suzuki N: "Behcet's syndrome. The Moleular Pathology of Autoimmunity, Second Edition"Ed by A N Theofilopulos and C A Bona, Gordon and Breach Science Publishers, Pensylvania, USA. 828-840 (2002)

[文献書誌] Suzuki N, Takeno M, Takeba Y, Nagafuchi H, Sakane T: "Autoimmunity in Behcet's desease. Immunology of Behcet's disease"Ed by M Zierhut, S Ohno, Swets & Zeitlinger, Lisse, The Netherlands (in press). (2003)

[文献書誌] Takeno M, Simoyama Y, Nagafuchi H, Suzuki N, Sakane T: "Neurophil hyperfinction on Behcet's disease. Immunnology of Behcet's disease"Ed by M Zierhut, S Ohno, Swets & Zeitlinger, Lisse, The Netherlands (in press). (2003)

[文献書誌] Sakane T, Suzuki N: "Neuro-endocrine-immune axis in human rheumatoid arthritis"Autoimmunity Kluwer Academic Publishers, Wroclaw, Poland (in press). (2003)

[文献書誌] 鈴木登: "免疫不全の分子機構, わかりやすい内科学第2版"井村裕夫編, 文光堂. 310-313 (2002)

[文献書誌] 鈴木登, 宮城司: "膠原病類縁疾患に伴う関節炎(Behcet病など)「骨・関節疾患」"朝倉書店 (印刷中). (2003)

[文献書誌] 鈴木登: "全身性エリテマトーデス 病因 インフォームドコンセントのための図説シリーズ 膠原病"医薬ジャーナル社 (印刷中). (2003)

2002 年度実績報告書

鈴木登聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (40235982)

[文献書誌] 宮城司, 千葉俊明, 鈴木登: "再生医学"聖マリアンナ医科大学雑誌. 30. 121-129 (2002)

[文献書誌] 鈴木登: "検査値異常から読む病態と診断計画リンパ球芽球化試験"臨床医. 28増刊号. 1169-1171 (2002)

[文献書誌] 武半優子, 岳野光洋, 柏倉淳一, 鈴木登: "ヒトTh1細胞特異的Tec familyチロシンリン酸化酵素、Txkの機能解析と各種自己免疫疾患における発現"炎症・再生. 22(5). 475-479 (2002)

[文献書誌] 鈴木登: "全身性エリテマトーデス病因インフォームドコンセントのための図説シリーズ膠原病"医薬ジャーナル社 (印刷中). (2003)