リンパ球親和性ヘルペスウイルスによる白血病治療の基礎的研究

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14657192
• 研究機関: 藤田保健衛生大学
• 研究代表者: 浅野 喜造 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (40131180)
• 研究分担者: 吉川 哲史 藤田保健衛生大学, 医学部, 助教授 (80288472) ; 須賀 定雄 藤田保健衛生大学, 医学部, 助教授 (70257616)
• キーワード: HHV-6B / MT-4細胞 / 成人T細胞性白血病 / アポトーシス / 治療

研究概要

1)MT-4細胞でのウイルス抗原陽性細胞の推移:MT-4細胞にHHV-6B(Z29株)を感染させ、HHV-6の前初期蛋白に対する抗体IEA/ex3、後期蛋白に対する抗体OHV-3を用いてウイルス抗原陽性細胞数を経時的に観察した。その結果、IEA/ex3抗原陽性細胞は感染後4時間目から陽性細胞が出現し、48から72時間目には約60%の細胞が抗原陽性となった。また、OHV-3抗原陽性細胞は24時間目から抗原陽性細胞が出現し72時間目に約50%の細胞が抗原陽性となった。
2)MT-4細胞におけるHHV-6増殖曲線作成:MT-4細胞にHHV-6B(Z29株)をMOI=1で感染させ、ウイルス増殖を調べた結果、新生HHV-6粒子の効率的な産生が確認された。
3)リアルタイムPCRによるウイルスDNA量の推移:2)と同様にウイルス接種後のMT-4細胞を経時的に採取し、DNA抽出。採取された検体中のHHV-6DNA量をリアルタイムPCR法で解析した。2)の結果を裏付けるように、HHV-6DNAは感染後徐々に増加し、感染後72時間でピークに達しその後徐々に低下してゆくことが確認された。
4)HHV-6感染MT-4細胞の細胞死についての検討:MT-4細胞にHHV-6B(Z29株)を感染後、24時間、48時間後に細胞を採取し、IEA/ex3抗体、アネキシン抗体を用いてフローサイトメーターで陽性細胞の検討を行った。その結果、感染48時間後の細胞で、HHV-6抗原陽性細胞だけでなく、HHV-6抗原陰性細胞も高率にアポトーシスに陥っていることが確認された。

研究成果

• [文献書誌] Yoshikawa T, et al.: "Fatal adult case with severe lymphocytopenia associated with reactivation of human herpesvirus 6"J Med Virol. 66. 82-85 (2002)
• [文献書誌] Yoshikawa T. et al.: "Latent infection of human herpesvirus 6 in astrocytoma cell line and alteration of cytokine synthesis"J Med Virol. 66. 497-505 (2002)
• [文献書誌] Yoshikawa T. et al.: "Human herpesvirus 6 viremia in bone marrow transplant recipients : clinical features and risk factors"J Infect Dis. 185. 847-853 (2002)
• [文献書誌] Ihira M. et al.: "Monitoring of active HHV-6 infection in BMT recipients by real time PCR ; comparison to detection of viral DNA in plasma by qualitative PCR"Microbiol Immunol. 46. 701-705 (2002)
• [文献書誌] Ohashi M. et al.: "Reactivation of human herpesvirus 6 and 7 in pregnant women"J Med Virol. 67. 354-358 (2002)
• [文献書誌] Ihira M. et al.: "Serological examination of human herpesvirus 6 and 7 in patients with coronary artery disease"J Med Virol. 67. 534-537 (2002)