発生工学的手法を用いた白血病関連転写因子TELの機能解析

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14657248
• 研究機関: 獨協医科大学
• 研究代表者: 三谷 絹子 獨協医科大学, 医学部, 教授 (50251244)
• 研究分担者: 牧 和宏 獨協医科大学, 医学部, 助手 (50337391) ; 和賀 一雄 獨協医科大学, 医学部, 講師 (00285917) ; 中村 裕一 獨協医科大学, 医学部, 講師 (20227896)
• キーワード: TEL / トランスジェニックマウス / コンディショナルマウス / Creリコンビナーゼ / Lox-P配列

研究概要

1.TELトランスジェニックマウスの作製
TEL及びそのドミナント・ネガティブ体であるHLH(helix-loop-helix)欠失変異体ΔHLHをGATA-1プロモーター下に発現するトランスジェニックマウスを作製した。現在、F1個体の解析中である。
2.TELコンディショナルマウスの作製
CBAマウスゲノムライブラリーからTELの第6エクソンを含む領域約24kbをクローニングした。制限酵素地図を作製後、第6エクソンの両端とそれに続くネオマイシン耐性遺伝子の端にLox-P配列を挿入したターゲッティングベクターを作製した。ES細胞TT2にエレクトロポレーションにて直線化したターゲッティングベクターを遺伝子導入し、G418によるポジティブ選別を行い、相同組み換え体を得た。さらに、この相同組み換え体にpMC1-Creベクターをエレクトロポレーションで導入し、Creリコンビナーゼを一時的に発現させることでLox-P配列を挟む領域を欠失させた。ネオマイシン耐性遺伝子のみを削ったものをI型欠失、第6エクソンとネオマイシン耐性遺伝子を削ったものをII型欠失、第6エクソンのみを削ったものをIII型欠失と称するが、現在I型欠失組み換え体のみ選別が終了している。今後、I型及びII型欠失相同組み換えEs細胞を用いて8細胞期凝集法によるキメラマウスの作製を行い、さらに交配によりI型欠失ヘテロマウス(TELflox/WT)、II型欠失ヘテロマウス(TELΔ/WT)を得る予定である。

研究成果

• [文献書誌] Izutsu, K.: "The t(3;21) fusion product, AML1/Evi-1, blocks AML1-induced transactivation by recruiting CtBP"Oncogene. 21. 2395-2703 (2002)
• [文献書誌] Tsurumi, S.: "N-ras and p53 gene mutations in Japanese patients with myeloproliferative disorders"Am J Hematol. 71. 131-133 (2002)
• [文献書誌] Arai, H.: "Functional regulation of TEL by p38-induced phosphorylation"Biochem Biophys Res Comm. 299. 116-125 (2002)
• [文献書誌] Imai, Y.: "Mutational analyses of the AML1 gene in patients with myelodysplastic syndrome"Leuk & Lymph. 43. 617-621 (2002)
• [文献書誌] Waga, K.: "Leukemia-related transcription factor TEL accelerates differentiation of Friend erythroleukemia cells"Oncogene. 22. 59-68 (2003)
• [文献書誌] Nakamura, F.: "Monocytic leukemia with CALM/AF10 rearrangement showing mediastinal emphysema"Am J Hematol. 72. 138-142 (2003)