| 研究概要 |
1.Nphs1-tTAトランスジェニック(TG)マウスの解析:11匹のTGマウスが得られたが、トランスジーンの発現はいずれも弱く、発現のレポーターであるEGFPの発光は検出できなかった。RT-PCRで検出されたtTAの発現が最も強い系統を、SV40Tマウスとの交配用に選択した。
2.tet-op SV40Tマウスの解析:筋肉内iv vivo electroporationによりtTAを導入し、レポーターlacZ遺伝子の発現を解析した。2系統に強く、1系統に弱く発現が認められ、これらを交配用に選択した。
3.Nphs1-tTA, tet-op SV40TダブルTGマウスの解析:SV40Tの発現は弱く、腎臓の形態は正常であった。Nphs1-tTAマウスのトランスジーンの発現が弱いのが問題と考えられた。
4.NPHS2-tTAマウスの作製:上記問題を解決するため、Nphs1プロモーターより、発現のペネトランスが高いと報告されているNPHS2(human podocin gene)のプロモーターをクローニングし、tTA geneと結合させた。また、EGFPが、トランスジーンの発現をモニターするのに役立たなかったため、今回はlacZを結合させた。マウス受精卵200個にマイクロインジェクションし、10匹のTGマウスを得た。1系統のマウスが、すべての糸球体上皮細胞に強力にlacZを発現した。
5.今後の計画:本プロジェクトの完遂には、1)NPHS2-tTAマウスが、tTAを発現している事の確認、2)tet-op SV40Tと交配、3)ダブルTGマウスにおけるSV40Tの発現、テトラサイクリンによる調節性の解析、4)形態的解析が必要で、これらを計画の期間内に完了する事は不可能となった。本計画は、新たな実験手段の開発を含み、また興味深い結果を期待できるので、これを続行すべく新たな研究費の獲得をめざしている。
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