| 研究分担者 |
岩田 淳 島根医科大学, 医学部, 助手 (10203382)
内尾 祐司 島根医科大学, 医学部, 教授 (20223547)
越智 光夫 島根医科大学, 医学部, 教授 (70177244)
安達 伸生 広島大学, 医学部付属病院, 医員 (30294383)
錦織 哲也 島根医科大学, 医学部, 講師 (00243436)
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| 研究概要 |
gelatin処理したplateにESQ feeder細胞を播種し培養した。1日後、ES細胞を融解し、1x10^6 cells/dishとなるようにFeeder細胞上に播種し増殖させた。増殖後3日に、トリプシン/EDTA溶液を添加してたfeeder細胞を除去後、ES細胞を分離して、再び細胞数を調整したfeeder細胞上に播種させた。これに対して、Fibroblast growth factorおよびTransforming growth factor betaを添加し、軟骨誘導を図り、s組織学的変化、typeII collagen、s-100蛋白などの免疫組織学的検索、RT-PCRを用いたcollagenおよびアグリカンmRNAの発現を検索中である。これらの成長因子の投与に関する至適条件、投与時期、投与量について現在検討中である。次年度はこの至適条件を明らかにすると共に、軟骨誘導後、I型コラーゲンゲルに包埋し、in vitroで培養後、SCIDマウスの各部(膝関節内と皮下)に移植し,経時的に移植組織の組織学的所見を観察する予定である。さらに移植部組織のRNAを抽出後,軟骨・骨形成に関与するとされるBMPおよびその調節因子であるNogginやChordin, cbfa-1,筋細胞分化に関与するとされるmyo-D,軟骨形成因子と考えられているCDMP-1,GDF-5,軟骨芽細胞の増殖、分化に関わる遺伝子としてのTGF-β,bFGFについて解析する予定である。
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