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本研究は、麻薬耐性成立過程においてオピオイド受容体と相同性が高いノシセプチン受容体が果たす役割を明らかにすることを目標としている。
すでにクローン化したcDNAを鋳型として、PCR法により、各受容体蛋白のN末端にtag(hemaggulutinin、FLAG、c-mycなどのアミノ酸配列を有する抗体認識部位)が付いた蛋白をコードするcDNAを合成し、培養細胞に発現させるためのプラスミドに組み込み、発現ベクターを作成した。発現ベクターを単独で、あるいは組み合わせて、培養細胞(CHOあるいはHEK293)に導入した。オピオイド受容体とノシセプチン受容体の両者を発現する細胞を用い、tagに対する抗体を用いた免疫沈降法とimmunoblot法の組み合わせにより、両受容体の複合体の検出を試みた。種々の条件検討を行ったが、複合体形成は少量であった。ノシセプチン受容体およびオピオイド受容体のアゴニストあるいはアンタゴニストの結合親和性をリガンド結合実験により評価した。両受容体のアゴニストの存在が、他の受容体のリガンド結合親和性に及ぼす影響について検討したが、有意の変化は認めなかった。
オピオイド受容体の糖鎖が果たす役割は、明らかにされていない。糖鎖付着が推測されるアミノ酸残基を置換した変異受容体を作成した。今後はそのリガンド親和性や細胞情報伝達機構を検討し、受容体脱感作における糖鎖の意義についても検討する予定である。さらにノシセプチン受容体についても同様の検討を計画している。
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