唾液腺悪性腫瘍の診断・治療へのマイクロダイセクションとマイクロアレイの応用

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14657472
• 研究機関: 昭和大学
• 研究代表者: 立川 哲彦 昭和大学, 歯学部, 教授 (10085772)
• 研究分担者: 入江 太朗 昭和大学, 歯学部, 講師 (00317570)
• キーワード: マイクロダイセクション / マイクロアレイ / 唾液腺腫様 / 腫瘍 / 腺様嚢胞癌 / 遺伝子発現

研究概要

【研究の経過】
1)手術材料の形態学的解析:ホルマリン固定手術材料をパラフィン標本作製し、臨床病理学的解析を行った。必要に応じ、特殊染色や免疫染色を行い、分子生物学的解析結果との対比のためのデータを揃えた。また、解析に用いた症例は、臨床経過・検査データ・手術所見・経過に関するデータを保存した。
2)Laser microdissection(LM)標本作製:LMに用いるための処理を施したスライドグラスを使用し、8μmで凍結切片の薄切を行った。ステップセクションで一枚おきにHE染色標本を作製しておく。薄切標本は-40℃で保存した。
3)Laser microdissection(LM)とReal time PCR法による解析:Microarrayの結果がLaser microdissectionによるサンプリングにより影響を受ける可能性があるため、適正なサンプリング数・部位の検討を行った。また、昨年度、発表した論文(日本唾液腺学会誌 43巻 p57-61,2002)に基づいてそのいくつかの遺伝子についてLMとReal time PCR法を用いて腺様嚢胞癌の各々組織構築における発現量について解析を行った。
【研究結果】
平成14年度に行ったマイクロダイセクションとマイクロアレイを用いた腺様嚢胞癌における遺伝子発現解析の予備的解析により、腺様嚢胞癌の様々な組織構築の違いを生じる原因としていくつかの遺伝子の関与が示唆されるに至った。これにより見いだされた遺伝子のいくつかについてLMとReal-time PCR法により追加検証を行ったところ、それぞれの腺様嚢胞癌の組織構築における遺伝子発現量の差異に再現性が認められた。今後さらに症例数を積み重ねることにより、さらに信頼性の高い結果が得られるものと考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Irie T, Aida T, et al.: "Laser pressure cell transfer method, a new microdissection technique to frozen section."Oral Med Pathol. 9(1)(in press). (2004)
• [文献書誌] Irie T, Aida T, Tachiliawa T: "Gene expression profiling of oral squamous cell carcinoma using laser microdissection and cDNA microarray."Med Electron Microsc. 37(2)(in press). (2004)
• [文献書誌] Irie T, Tachikawa T: "Genetic diagnosis of oral cancer using laser microdissection and cDNA microarray."JJADS. 23(in press). (2004)
• [文献書誌] Tachikawa T, Irie T: "A new moleculary-biological approach in the morphology-basic method and application of the laser microdissection"Med Electron Microsc. 37(2). (2004)