ビーム偏向法とキャピラリー電気泳動分析による細胞死関連物質輸送の新しい測定法

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14658212
• 研究機関: 福井大学
• 研究代表者: 呉 行正 福井大学, 工学部, 助教授 (70234961)
• 研究分担者: 寺田 聡 福井大学, 工学部, 助手 (60311685) ; 近藤 隆 富山医科薬科大学, 医学部, 教授 (40143937)
• キーワード: ビーム偏向法 / 単一細胞 / キャピラリー電気泳動 / 濃度勾配 / タンパク質

研究概要

1.細胞膜での濃度勾配の経時変化をモニタリングできることを目指すレーザー顕微偏向測定系を作製した。測定系は半導体レーザー(670nm)、顕微鏡、偏向検出器(二分割フォトダイオード)から構成される。レーザービームは顕微鏡内で1回反射し、対物レンズにより目的細胞近傍に絞る。そのビームをハーフミラーで一回反射し、レンズにより二分割フォトダイオードに中心に絞る。また、二分割フォトダイオードを偏向検出器として使用する方が今までの位置検出器より一桁高感度であることを明らかにした。また、単一細胞のモデルとして、単一イオン交換樹脂を使用して、イオン交換樹表面で行っているイオン交換反応に伴う濃度勾配を本法で測定できることを明らかにした。
2.タンパク質イオン、アミノ酸などの小イオンのキャピラリー電気泳動分析条件も明らかにした。また、UV検出器を用いる場合、キャピラリー電気泳動分析は低光路長のため濃度検出感度が低いことを改良するために、キャピラリー先端で試料を濃縮してからキャピラリー電気泳動分析を行うことも検討した。結果として、タンパク質のキャピラリー電気泳動分析の濃度検出感度が2桁向上した。
3.タンパク質の等電点を測定できる等電点キャピラリー電気泳動分析条件を明らかにした。
4.付着性細胞の培養条件を確定した。

研究成果

• [文献書誌] Xing-Zheng Wu: "New Approaches of Sample Preparation for Capillary Electrophoresis"Trends in Analytical Chemistry. 22. 48-58 (2003)
• [文献書誌] Xing-Zheng Wu, Janusz Pawliszyn: "Whole Column Imaging Capillary Electrophoresis of Proteins with a Short Capillary"Electrophoresis. 23. 542-549 (2002)
• [文献書誌] Xing-Zheng Wu, Takeshi Yammamoto, Masanori Hatashita: "Radiolytic Degradation of Chlorinated Hydrocarbon in Water"Bull. Chem. Soc. Jpn.. 75. 2527-2532 (2002)
• [文献書誌] Tiemin Huang, Peter Ertl, Xing-Zheng Wu, Susan Mikkelsen, Janusz Pawliszyn: "Microfabrication of microfluidic device for isoelectric electric focusing"Sensors and Materials. 14. 141-149 (2002)
• [文献書誌] Xing-Zheng Wu: "2.Wilson & Wilson's Comprehensive Analytical Chemistry, Edited by D. Barcelo, Volume XXXVII, Sampling and Sampling Preparation Techniques for Field and Laboratory, by J. Pawliszyn Pawliszyn (Chapter 29, Sample Cleanup and Concentration Techniques for Capillary Electrophoresis)"Elsevier Science. 1131(14) (2002)