Transfer RNA分子におけるクローバーリーフ構造の安定化戦略の解明

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14704011
• 研究機関: 豊橋技術科学大学
• 研究代表者: 田中 照通 豊橋技術科学大学, 工学部, 助教授 (30273337)
• キーワード: Ribonuclease P / tRNA / cloverleaf / intron / extra variable loop / coevolution

研究概要

tRNAはタンパク質生合成系におけるアミノ酸の運び手であり遺伝暗号の担い手でもある基本的な生体分子である。この分子は細胞内に約50種存在するが、その構造は対応するアミノ酸や由来する生物種を超えて共通のクローバーリーフ構造をとっている。この構造の維持は効率的なタンパク質合成においては必須の条件であるため、それぞれの生物種においてそれぞれのtRNA分子は何らかの構造安定化戦略をとっているものと考えられる。tRNA分子の安定化に種々の塩基修飾が寄与していることは既に知られているが、本申請研究では、塩基修飾を受ける以前のtRNA前駆体における安定性を1つの評価の指標とした。tRNA前駆体分子の安定性は、きちんとした成熟化tRNAの生成の条件であり、重要な評価の基準となる。tRNA分子の安定性の評価の方法としては、「大多数」を評価するための統計的な状態を反映する方法と、「微量な」変性を検出するための方法とを採用した。
「微量な」構造変性を検出する方法として真正細菌リボヌクレアーゼPを採用した.この酵素はtRNA成熟化酵素の1つであり、「きちんと」フォールディングしたtRNA前駆体を基質とするが、同時に、高濃度Mgイオンの存在下ではCCA付きのヘアピン型RNAをも基質として認識できる。反応条件をコントロールすることで、変性したもしくはフォールディングに失敗したtRNAを検出することができる。この酵素による検出系では切断産物の蓄積を通して、微量な存在比のものでも検出ができるところにある。この方法によって既に幾つかのtRNAの安定性評価を行い、由来する生物種によってtRNAの構造安定性に差異があることを報告してきた。また、これらの実験結果は向じ細胞内におけるtRNA分子とリボヌクレアーゼP分子とにおける共進化モデルを与えた。
また、上記の方法論によってtRNAイントロンはtRNA前駆体における構造安定化装置ではなく別の意味を持つことや、数種のtRNA分子に見られる長いエクルトラループという部分構造がtRNA分子の安定化に大きく寄与していることなどが明らかとなった。今後は、従来の酵素による検出系と併せて、物理化学的な測定を合わせことで、これらの実験結果を別の視点から追試し、より詳細な解析を進める。

研究成果

• [文献書誌] Tomoaki Ando et al.: "Substrate shape specificity of E. coli RNase P ribozyme is dependent on the concentration of magnesium ion."Journal of Biochemistry. 133. 445-451 (2003)
• [文献書誌] Terumichi Tanaka et al.: "E. coli tRNAs are resistant to the hyperprocessing reaction of homologous E. coli ribonuclease P ribozyme."Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 67. 1172-1176 (2003)
• [文献書誌] Terumichi Tanaka et al.: "Revisiting the substrate recognition of bacterial ribonuclease P --- in the view of the recognition of the base N73 in the substrate."Nucleic Acids Research. Suppl.No.3. 275-276 (2003)
• [文献書誌] Tomoaki Ando et al.: "Bacterial ribonuclease P reaction is affected by substrate shape and magnesium ion concentration."Nucleic Acids Research. Suppl.No.3. 293-294 (2003)
• [文献書誌] Seiichiro Nishimura et al.: "Extracellular DNA and RNA produced by a marine photosynthetic bacterium Rhodovulum sulfidophilum."Nucleic Acids Research. Suppl.No.3. 279-280 (2003)
• [文献書誌] Yasuhiro Nagai et al.: "Recognition of tRNA variants by bacterial ribonuclease P."Nucleic Acids Research. Suppl.No.3. 281-282 (2003)
• [文献書誌] Tomoaki Ando et al.: "Comparative analyses on hairpin substrate recognition by E. coli and B. subtilis RNase P ribozymes."Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 67. 1823-1827 (2003)
• [文献書誌] Tomoaki Ando et al.: "The protein component of bacterial RNase P flickers the metal ion response of the substrate shape preference of the ribozyme."Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 67. 2294-2296 (2003)
• [文献書誌] Terumichi Tanaka et al.: "Another cut for lysine tRNA : Application of the hyperprocessing reaction reveals another stabilization strategy in metazaon lysine tRNAs."Journal of Biochemistry. 131. 839-847 (2002)
• [文献書誌] Tomoaki Ando et al.: "Kinetic analysis on hyperprocessing reaction of human tyrosine tRNA by E. coli ribonuclease P ribozyme."Bioscience, biotechnology, and Biochemistry. 66. 1967-1971 (2002)
• [文献書誌] Tomoaki Ando et al.: "Regulation of bacterial RNase P ribozyme by divalent cation and guide DNA."Nucleic Acids Research. Suppl.No.2. 271-272 (2002)
• [文献書誌] Yoshiaki Hori et al.: "Porphyrins and porphines inhibit the ribonuclease P reaction in vitro."Nucleic Acids Research. Suppl.No.2. 111-112 (2002)
• [文献書誌] Terumichi Tanaka et al.: "Guide DNA technique in bacterial ribonuclease P reaction for effective processing of tRNA precursor."Biotechnology and Applied Biochemistry. 36. 85-88 (2002)
• [文献書誌] 田中照通, 菊池洋: "「生体の科学」53巻2号・特集「RNA」「RNA酵素に生命の謎解きができるか?」"(財)金原一郎記念医学医療振興財団. 136-141 (2002)