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近年、再生医工学の研究が進み、歯周組織再生療法に関しても成長因子の応用が考えられ既に臨床応用への試みがなされているが、その作用機序については不明な点が多い。そこで本研究では、in vivoにおける各種成長因子の歯根膜細胞への影響を検討することを目的とした。
ラットの第3臼歯を抜歯し、歯冠と近心根を切断し、歯髄を除去した。得られた遠心根をα-MEM{アスコルビン酸(50μg/ml)+βグリセロフォスフェート(5mM)+10%FCS含有}のみ、または同培地にrhbFGF(10ng/ml)、rhBMP-2(100ng/ml)、rhTGF-β1(3ng/ml)を添加した培地で48時間培養した。その後、歯根をラット背部皮下に移植し、7日および14日後に周囲の皮下結合組織とともに採取し、4%パラフォルムアルデヒドで固定後、10%EDTAで脱灰し、AMeX法にてパラフィン包埋を行った。得られたパラフィンブロックから厚さ約4μmの連続切片を作製し、HE染色を行い、歯根および歯根膜組織の状態を病理組織学的に観察した。
7日、14日群の全ての歯根で破歯細胞の出現と歯根吸収が観察され、その頻度は14日群で多かった。また、セメント質の表面にヘマトキシリンに濃染する部分が観察された。今後、ヘマトキシリン濃染部およびその近辺に存在する細胞に関して解析する必要がある。
今後、まずrhbFGF(10ng/ml)、rhBMP-2(100ng/ml)を添加した培地で培養期間を延長(96時間および144時間)歯根を作製し、皮下移植後7、14、21、28日群を作製し病理組織学的に観察する予定である。
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