|
ブレオマイシン(BLM)は、扁平上皮癌や精巣癌などの治療に用いられる優れた抗癌剤であるが、副作用として重篤な肺線維症を引き起こしやすいため、その使用には制限が伴う。これまで、ヒト肺正常線維芽細胞(WI-38)を用いて、BLM投与時に引き起こされる遺伝子発現の変化を蛍光Differential Display法により解析した結果、transforming growth factor β(TGF-β)のsuperfamilyに属すると考えられる遺伝子の発現が、BLMにより誘導されることを明らかにした。しかしながら、これまでクローン化したのは3'側の一部の遺伝子であったため、本研究においては、その全長型cDNAをクローニングし、本遺伝子の機能と肺線維化との関わりを明らかにすることを目的とした。
TGF-βのsuperfamilyに属すると考えられる遺伝子の全長型cDNAをクローニングするため、まず、これまで得られている3'側の配列情報に基づき、遺伝子特異的プライマー(GSP)を2種類作成後、5'-RACE System (GIBCO BRL)を用いて全長型cDNAの取得を試みたが、クローニングできなかった。そこで、新たに4種類のGSPを作成し、Smart RACE cDNA Amplification Kit (Clontech)を用いて5'-RACEを行った結果、目的のcDNAと考えられる遺伝子断片の増幅に成功した。現在、この遺伝子断片をT-vectorにクローニングし、その塩基配列の決定を行っている。来年度(継続)は、クローニングした全長型遺伝子の機能と肺線維化との関わりを明らかにしていきたいと考えている。
|
