ブレオマイシン肺線維症のトリガー新規TGF-β遺伝子の働き

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14771283
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 熊谷 孝則 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (70274058)
• キーワード: ブレオマイシン / 肺線維症 / Differential Display / Transforming growth factor / 5'-RACE / RT-PCR

研究概要

ブレオマイシン(BLM)は、精巣癌などの治療に用いられる優れた抗癌剤であるが、副作用として重篤な肺線維症を引き起こすため、その使用には常に制限が伴う。これまで、ヒト肺正常線維芽細胞(WI-38)にBLMを投与した際に引き起こされる遺伝子発現の変化を、Differential Display(DD)法により調査した結果、transforming growth factor β(TGF-β)のsuperfamilyに属すると考えられる遺伝子の発現が昂進することを発見した。RT-PCRにより、BLM投与後、約3時間後から本遺伝子の発現が昂進することを明らかにしている。本研究では、本遺伝子とBLM肺線維症の関係を明らかにすることを目的とした。
DD法により得られた遺伝子は、その3'末端の一部の配列であったため、まず、全長型遺伝子を5'-RACE法によりクローニングすることを試みた。3'末端配列の情報に基づき、遺伝子特異的プライマー(GSP)を数種類作成後、Smart RACE cDNA Amplification Kit (Clontech)を用いて5'-RACEを行った結果、全長型遺伝子と考えられる断片を得ることができた。シークエンシングの結果、得られた遺伝子の3'末端配列は、TGF-β superfamily遺伝子と相同性を示したが、その5'側の配列はDatabase上の遺伝子と明確な相同性を示さなかった。現在、得られた全長型遺伝子を発現ベクターpcDNA 3.1(Invitrogen)に導入し、本遺伝子の過剰発現が線維芽細胞に及ぼす影響を調査している。また、得られた全長型遺伝子が目的の遺伝子でない場合も考慮し、5'-RACEによるクローニングも並行して行っている。

研究成果

• [文献書誌] Matsuo, H.: "Molecular mechanism for the enhancement of arbekacin resistance in a methicillin-resistant Staphylococcus aureus"FEBS Letters. 546. 401-406 (2003)
• [文献書誌] Yuge, L.: "Cell differentiation and p38MAPK cascade are inhibited in human osteoblasts cultured in a three-dimensional clinostat"In Vitro Cellular and Developmental Biology. 39. 89-97 (2003)
• [文献書誌] Matsuo, H.: "Molecular cloning of a D-cycloserine resistance gene from D-cycloserine-producing Streptomyces garyphalus"Journal of Antibiotics. 56. 762-767 (2003)
• [文献書誌] Yuge, L.: "Physical stress by magnetic force accelerates differentiation of human osteoblasts"Biochemical and Biophysical Research Communications. 311. 32-38 (2003)
• [文献書誌] Kohashi, P.Y.: "An efficient method for the overexpression and purification of active tyrosinase from Streptomyces castaneoglobisporus"Protein Expression and Purification. 34. 202-207 (2004)